核盘菌C2H2型锌指蛋白转录因子SsSte12的功能研究

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1、分类号：S432.1单位代码：10183研究生学号：2015862021密级：公开吉林大学硕士学位论文（学术学位）核盘菌C2H2型锌指蛋白转录因子SsSte12的功能研究TheFunctionalAnalysisofC2H2TypeTranscriptionFactorSsSte12inSclerotiniasclerotiorum作者姓名：徐廷滔专业：植物保护研究方向：植物病原真菌学指导教师：张艳华教授培养单位：植物科学学院2018年6月核盘菌C2H2型锌指蛋白转录因子SsSte12的功能研究TheFunctionalAnalysisofC2H2Type

2、TranscriptionFactorSsSte12inSclerotiniasclerotiorum作者姓名：徐廷滔专业名称：植物保护指导教师：张艳华教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年5月28日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进

3、行研宄工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明＞本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。■３学位论文作者签名：％曰期：丨｛ｆ年汐月曰／中文摘要核盘菌C2H2型锌指蛋白转录因子SsSte12的功能研究核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum）是一种具有危害性的农业病原菌，每年都会在全球范围内造成巨大的经济损失。核盘菌的菌核和侵染垫结构在其长期存活以及成功侵染广泛的宿主中扮演着至关重要的角色。

4、促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联在菌核发育和致病侵染等方面充当着核心信号传导复合物的重要作用。本研究对核盘菌MAPK级联中假定的下游转录因子SsSte12进行了分析。首先从核盘菌cDNA中克隆得到SsSte12基因编码序列，全长2085bp，含有STE和Zf-C2H2两个保守结构域。设计了两个沉默靶点pSD2Target和pSD3Target，成功构建得到沉默载体pSD2-SsSte12和pSD3-SsSte12。利用PEG-GaCl2介导的核盘菌原生质体转化得到沉默转化子，经过鉴定筛选得到8个阳性SsSte12RNAi突变体菌株pSD2-1、pSD2

5、-4、pSD2-11、pSD2-12、pSD3-1、pSD3-4、pSD3-7和pSD3-8作为后续研究。为了阐述SsSte12基因的功能，对8个SsSte12RNAi突变体菌株和野生型核盘菌UF-1进行了以下研究：（1）菌落形态和生长速率对比分析；（2）菌核形成数量和菌核干重对比分析；（3）显微观察菌丝形态和侵染垫的形成情况；（4）全叶法、半叶法和伤口侵染实验观察RNAi突变体和UF-1侵染离体植物宿主时的致病力。结果表明SsSte12RNAi突变体导致了菌丝营养生长变缓慢、菌核个体变小以及形成较少的附着胞，因此，SsSte12RNAi突变体也减弱了侵染

6、宿主植物的致病力。酵母双杂交（Y2H）检测和双分子荧光互补实验（BiFC）验证了SsSte12和SsMCM1转录因子在细胞核中存在相互作用，但是qRT-PCR实验表明SsSte12RNAi突变体中SsMCM1的表达与SsSte12无关。结合在核盘菌早期发育过程中伴随着高SsSte12基因转录物的积累，我们的结果表明SsSte12作为MAPK的下I游转录因子在菌丝生长、菌核发育和附着胞形成中扮演着调控作用，而SsSTE12和SsMCM1的相互作用可能在调控核盘菌编码这些性状的基因中发挥重要作用。关键词：SsSte12，核盘菌，菌核发育，附着胞，致病性，SsM

7、cm1IIAbstractTheFunctionalAnalysisofTheC2H2TypeTranscriptionFactorSsSte12inSclerotiniasclerotiorumSclerotiniasclerotiorumisonechallengingagriculturalpathogentomanageandcauseslargeglobaleconomiclossesannually.Thesclerotiumandinfectioncushionsarecriticalforitslong-termsurvivalandsuc

8、cessfulpenetrationonbroadofhosts.