基于核酸适配体结构开关的卡那霉素和氯霉素残留分析研究

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1、分类号：TS201单位代码：10183研究生学号：2016464009密级：公开吉林大学硕士学位论文（专业学位）基于核酸适配体结构开关的卡那霉素和氯霉素残留分析研究Studiesonkanamycinandchloramphenicolresiduesanalysisbasedonstructure-switchingaptamers作者姓名：乔尚娜类别：工程硕士领域（方向）：食品安全与卫生检验指导教师：张鸣镝副教授培养单位：食品科学与工程学院2018年6月基于核酸适配体结构开关的卡那霉素和氯霉素残留分析研究Studiesonkanamycinandchlo

2、ramphenicolresiduesanalysisbasedonstructure-switchingaptamers作者姓名：乔尚娜领域（方向）：食品安全与卫生检验指导教师：张鸣镝副教授类别：工程硕士答辩日期：2018年5月28日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全、修改、发行、出租部或部分内容进行任何形式的复制、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则。，应承担侵权的法律责任吉林大学硕士学位论文原创性声明，本人郑重声明：所呈交学位论文，

3、是本人在指导教师的指导下独立进行研究工作所取得的成果＝除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本。文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月／日（（丨中文摘要基于核酸适配体结构开关的卡那霉素和氯霉素残留分析研究本研究隶属于国家自然科学基金面上项目《基于核酸适体结构开关和酶切循环信号放大的抗生素多残留分析研究》（31571919）。随着抗生素滥用现象的日益增多，对食品中抗生素残留的检测也日趋重要。传统的检

4、测方法主要包括高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用法，但对检测人员的技术要求较高，并且操作繁琐、耗时，难以满足现场快速检测的要求。核酸适配体以其特异性强、亲和性高、稳定性好、价格便宜等优势，已成为一种新型的生物传感器识别元件。核酸适配体结构开关在原则上来说具有通用性，应用范围十分广泛。本论文以检测牛奶中的卡那霉素和氯霉素残留为主要目标，将核酸适配体和荧光共振能量转移（FRET）相结合，构建了两种不同构型的核酸适配体结构开关，从而实现对目标物快速、灵敏的检测。研究主要内容包括：1.利用核酸适配体结构开关检测卡那霉素的方法，其特征是用荧光共振能量转移的原理，设计了

5、一种由标记了荧光基团的适配体和标记了猝灭基团的互补链构成的两条链结构开关。当目标物不存在时，适配体和互补链进行碱基互补配对，形成结构开关，此时荧光信号值较低。当目标物存在时，卡那霉素和适配体的高度亲和性促使结构开关打开，释放互补链，荧光基团和猝灭基团远离，此时荧光强度升高，根据前后荧光强度的变化对卡那霉素残留进行灵敏检测。经过一系列实验优化，得出开关2为最佳结构开关体系。在该体系的最佳反应条件下，卡那霉素在终浓度为100~700nM的范围内呈现良好的线性，其检出限为12.01nM，回收率为101.3%~109.1%。同时该方法也成功应用于实际样品的检测，具有

6、良好的稳定性并与国家标准方法得出的结果基本一致。该结构开关体系为卡那霉素的检测提供了一种新方法。2.由于核酸适配体上标记的荧光基团会使其与目标物结合的亲和力下降，因此在利用核酸适配体结构开关对氯霉素进行检测时，我们构建了由无标记的适配体、标记了荧光基团的FDNA和标记了猝灭基团的QDNA组成的三条链I的结构开关，实验原理与卡那霉素的检测原理基本相同，都是依据荧光分析来实现对目标物的检测。在最佳反应条件下，氯霉素浓度在1~100ng/mL范围内具有较好的线性关系，其检出限为0.75ng/mL，回收率为89.1%~106.6%。该方法操作简便、用时短，可以实现对

7、氯霉素残留的现场检测，并成功应用于实际样品牛奶中的检测，为氯霉素的检测提供了一种新思路。关键词：核酸适配体，结构开关，荧光共振能量转移，卡那霉素，氯霉素IIAbstractStudiesonkanamycinandchloramphenicolresiduesanalysisbasedonstructure-switchingaptamersWiththeincreasingabuseofantibiotics,thedetectionofantibioticresiduesinfoodhasbecomeincreasinglyimportant.Thetr

8、aditionaldetectionmethodsm