适配体传感器在卡那霉素检测中的应用

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1、分类号密级硕±学位论文题目：适配体传感器在卡那霉素检测中的应用ｃａｔｏｎｏｆａｔ；ｓｅｎｓｓｉｎ化ｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ英文并列题目；Ａｐｐｌｉｉｓｐａｏｒｋａｎａｍｃｉｎｙ研％生：罗继宝专业：生物化学与分子生物学研究方向：生物大分子的结构、功能与制备导师：周楠迪教授；指导小组成员：学位授予日期答辩委员会主席：陆健教授江南大学地址：无锡市蠢湖大道１８００号二〇—五年十二月独创性声巧人在导师指导下进行的研究王作及取本人声明所呈交的学位论文是本得的研究成

2、果了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文。尽我所知，除中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得江南的材料一同工作的同志大学或其它教育机构的学位或证书而使用过。与我对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。、日期：化心＾签若：乔陳夺关于论文使用授权的说明大学有关保留：本学位论文作者完全了解江南、使用学位论文的规定论文的复印件和端盘，允江南大学有权保留并向国家有关部口或机柏送交许论文被查阅和借閑，可Ｗ将学位论文的全部或部段保分内容编入有关数据库进行检人索，可Ｗ采用影印、缩印或担描等复制手存

3、、汇编学位论文，并丑保本电子文档的内容和纸也质论文的内容相一致。签密的学位论文在解密后遵守此规定。心名：＿－导师签名：—１；－＇王、３。＾棘艾曰期：摘要摘要抗生素作为一类抗感染药物，自发现以来广泛应用于医药，农林业，渔业，畜牧业等领域。抗生素种类繁多，卡那霉素是其中一种常用的氨基糖苷类抗生素，以水溶性硫酸盐存在，具有抗菌谱广，杀菌效果明显等特点。不合理使用抗生素可导致耐药性增强，内毒素的产生和残留在食源性动物体内，不论是对食品质量还是安全都产生极大的影响和挑战。因此，建立操作简单，便携，特异性好，灵敏度高，不需要借助昂贵仪器的卡那霉素检测方法

4、，对于保障动物源性食品的安全具有重要意义。本研究针对卡那霉素的定性和定量分析建立了两种检测方法：第一种是基于核酸适配体的电化学法；第二种是利用核酸适配体的纳米模拟酶比色法。研究内容主要包括：建立基于核酸适配体的检测卡那霉素的电化学方法，将末端修饰巯基(-SH)的卡那霉素适配体固定在金电极表面得到适配体功能化的金电极，将该电极置于包含卡那霉素的样品溶液中，卡那霉素与电极表面适配体特异性结合产生构象变化及电极表面阻抗变3-/4-化，溶液中[Fe(CN)6]充当信号探针，卡那霉素与适配体结合后产生的电化学信号改变可通过差示脉冲伏安法(DPV)检测，进而实现定量检测。在优化条

5、件下（适配体浓度-11μmol·L，适配体自组装时间16h，卡那霉素结合时间30min），利用电化学法实现-1-1卡那霉素的检测范围是0.2到2000nmol·L。以相同浓度(500nmol·L)的庆大霉素，新霉素，链霉素，四环素以及超纯水代替卡那霉素验证该检测方法对卡那霉素的特异性。进一步对稀释5倍的含卡那霉素的牛奶样品进行了直接检测，结果表明牛奶样品中其他组分对卡那霉素残留的检测基本没有影响，该检测方法特异性好，灵敏度，适用于稀释牛奶样品中卡那霉素的直接检测。建立利用核酸适配体和纳米模拟酶的卡那霉素比色检测法。金纳米颗粒的模拟酶的性质可催化H2O2和3,3’,5,

6、5’-四甲基联苯胺(TMB)混合底物产生显色反应。适配体ssDNA能非共价吸附在金纳米颗粒(AuNPs)表面从而阻碍金纳米颗粒与底物的接触，催化作用被抑制，显色反应不能发生；卡那霉素特异性结合金纳米颗粒表面的卡那霉素适配体，使其游离到溶液中，金纳米颗粒重新暴露而催化活性恢复，表现为UV-vis比色法中TMB氧化产物(oxTMB)特征峰的吸收变化，通过650nm处吸光度的不同来表征卡那霉素浓度。据此建立的卡那霉素检测方法，在优化条件下，对卡那霉素检测的线性范围是5-200-1-1-1nmol·L，检测限为5nmol·L。再以相同浓度(500nmol·L)的卡那霉素，庆大

7、霉素，链霉素，新霉素以及超纯水来进行特异性验证，表明该方法具有较强的特异性。所用纳米模拟酶pH值适用范围宽，pH4.0催化效率最高；温度耐受性范围宽，最适催化温度为45℃，具有催化活性好，稳定性高，分散性强,可重复利用的优点。关键词：卡那霉素；适配体；纳米模拟酶；电化学；比色法IAbstractAbstractAsanti-infectivedrugs,antibioticsarewidelyusedinthefieldsofmedicine,agriculture,forestry,fisheriesandanimalhusbandrysincet