2017-2018学年高中生物专题5DNA和蛋白质技术课题3血红蛋白的提取和分离练习新人

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1、课题3血红蛋白的提取和分离晨背识记为先关键语句1.透析法分离蛋白质的目的是除去小分子杂质。2.利用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量大的夕洗脱出來，相对分子质量小的后洗脱出來。3.在电泳中，待分离样品中分子带电性质的差异以及夕子本身的大小、形状都会影响分子的迁移速度。4.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速率完全取决于夕与粗分离、子的大小。比丿5.蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品知识点二蛋白质分离的原理和方法［自读教材•夯基础］1.蛋白质分离的理论依据①分子的形状和大小蛋白质特性的差异、②所带电荷的性质和多

2、少③溶解度④吸附性质⑤对其他分子的亲和力2.分离的方法(1)凝胶色谱法：①概念：也称作分配色谱法,是根据相对分子质量的人小分离蛋白质的有效方法。形态：微小的多孔球体②凝胶<组成：大多数由多糖类化合物构成、结构：内部有许多贯穿的通道③原理：相对分子质量较小的蛋白质签易进入凝胶内部的通道，路程较氏,移动速度较慢，通过凝胶的时间较长;相对分子质量佼大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动，路程较短,移动速度饺快，通过凝胶的时间较短。(2)电泳:①概念：指带电粒了在电场的作用下发生迁移的过程。②原理：在一

3、定的吐下，多肽、核酸等生物大分子的可解离基团会带上正电或负电,在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③影响电泳速率的因素：知识点二蛋白质分离的原理和方法［自读教材•夯基础］1.蛋白质分离的理论依据①分子的形状和大小蛋白质特性的差异、②所带电荷的性质和多少③溶解度④吸附性质⑤对其他分子的亲和力2.分离的方法(1)凝胶色谱法：①概念：也称作分配色谱法,是根据相对分子质量的人小分离蛋白质的有效方法。形态：微小的多孔球体②凝胶<组成：大多数由多糖类化合物构成、结构：内部有许多贯穿的通道③原理：

4、相对分子质量较小的蛋白质签易进入凝胶内部的通道，路程较氏,移动速度较慢，通过凝胶的时间较长;相对分子质量佼大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动，路程较短,移动速度饺快，通过凝胶的时间较短。(2)电泳:①概念：指带电粒了在电场的作用下发生迁移的过程。②原理：在一定的吐下，多肽、核酸等生物大分子的可解离基团会带上正电或负电,在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③影响电泳速率的因素：各种分了各种分子的分离a・带电性质差异b・分了本身大小不同c・分子本身形状不同①方法：常用的

5、电泳方法冇琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。1.缓冲溶液(1)作用：在一定范闱内，抵制外界的酸和碱对溶液dH的影响,维持pH基木不变。⑵配制：由1〜2种缓冲剂溶解于水中配制而成,通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。［跟随名师•解疑难］1•凝胶色谱法(1)凝胶：是一些微小多孔的球体，内含许多贯穿的通道，具有多孔的凝胶，又称为分子筛。(2)原理：项FI相对分子质量大相对分子质量小直径大小大于凝胶颗粒空隙直径，被排阻在外而小于凝胶颗粒空隙直径，可以进入颗粒内部运动方式垂直向下移动无规则扩

6、散进入凝胶颗粒运动速度较快较慢运动路程较短较长洗脱次序先从凝胶柱洗脱出來后从凝胶柱洗脱出來2.电泳的常用方法(1)琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，所以，各种分子在电场中的迁移速率因各种分子的带电性质差异、分子大小、形状不同而不同，从而得以分离。(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳：①凝胶形成：单体(丙烯酰胺)+交联剂(N,N'・亚甲基双丙烯酰胺)j引发剂和催化剂三维网状结构凝胶②加入SDS的作用：使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链，与各种蛋白质形成蛋白质・SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超过了蛋白质分子原

7、有电荷量，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。［特別提醒］测定蛋白质相对分子质量通常用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，原因是在一-定浓度范围内聚丙烯酰胺对热稳泄性强，可用检测仪直接测泄。知识点二［自读教材•夯基础］1.样品处理⑴红细胞的洗涤:①目的：去除杂蛋口,以利于后续步骤的分离纯化。②过程:FA黄色血浆*吸出分层红细胞加入一低速短时二r纯净红3次)(五倍体积的生理盐水)血—低速短时样f间离心(1)血红蛋白的释放:①冃的：使红细胞破裂释放血红蛋白。②过程：红细胞+到原血液体积卄需+培

8、枕竺卄疋1,在磁力搅拌器血红蛋蒸懈水+［培琼“•f宀靱诂40%体积的甲苯上搅拌1°讪口释放(2)分离血红蛋白溶液混合液离心处用滤纸过滤除去軽性沉淀屋—分液漏斗屮静置片刻一分离出下层红色透明液体。2.粗分离一一透析(1)方法：将血红蛋口溶液装入透析袋中，将透析袋放入一定量适宜浓度的磷酸缓冲液中,透析12ho(2)目的：将相对分子质量较小的杂质除去。(3)原理：透析袋能使尘分予自由进出，而将大分子物质保