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时间:2019-08-30
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1、第+单元现代生物科技专题第36讲基因工程[考纲要求]1.基因工程的诞生(I)o2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(11)。3.基因工程的应用(II)o4.蛋白质工程(I)。5.实验:DNA的粗提取和鉴定。考点一基因工程的操作工具梳理知识要点1.基因工程的概念(1)供体:提供目的基因。(2)操作环境:体外。(3)操作水平:分子水平。(4)原理:基因重组。(5)受体:表达目的基因。(6)本质:性状在受体体内的表达。(7)优点:克服远缘杂交不亲和的障碍,定向改造生物的遗传性状。2.DNA重组技术的基本工具(1)限制性核酸内切酶(简称:限制酶)①來源:主要是从腿生物中分离纯化岀來
2、的。②作用:识别特定的核背酸序列并切开特定部位的两个核背酸之间的磷酸二酯键°③结果:产生黏性末端或平末端。(2)DNA连接酶①作用:将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。②类型常用类型EcohDNA连接酶t4dna连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体功能只缝合黏性末端缝合黏性末端和平末端结果恢复被限制酶切开的两个核昔酸之间的磷酸一酯键③DNA连接酶和限制酶的关系.限制忙T卩畀臂、DNA连接酶CTTAA-_G_⑶载体①种类:质粒、九噬菌体的衍生物、动植物病毒等。'能自我复制②质粒的特点{有一个至多个限制酶切割位点.有特殊的标记基因易混辨析载体和膜载体基因工程中的载体与细胞膜上物质
3、运输的载体不同。基因工程中的载体是质粒或动植物病毒等,能将目的基因导入受体细胞内;膜载体是蛋白质,与细胞膜的选择透过性有关。♦诊断与思考1.判断常考语句,澄清易混易错(1)限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶(X)(2)切割质粒的限制性核酸内切酶均能特异性地识别6个核甘酸序列(X)(3)DNA连接酶能将两碱基间通过形成的氢键连接起來(X)(4)£^//DNA连接酚既可连接平末端,又可连接黏性末端(X)(5)载体的作用是携带日的基因导入受体细胞中,使之稳定存在并表达(V)2.分析命题热图,明确答题要点下图中的图1和图2分别表示的是EsRI限制酶和S阳I
4、限制酶的作用示意图。请据图回答:切点中轴线切点黏性末端图1中轴线(切点)平末端图2⑴EcoRI限制酶和SmaI限制酚识别的碱基序列及切割的位点分別是什么?提示EcoRI限制酶识别的碱基序列是GAATTC,切割位点在G和A之间;I限制酶识别的碱基序列是CCCGGG,切割位点在C和G之间。(2)以上实例说明限制酶具有专一性。(3)要将图2中的末端再连接起来,需要£DNA连接酶。探究命题方向命题点一限制性核酸内切酶、DNA连接酶等酶的作用1.如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化,下面选项中能依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用顺序的是()B.①②④③D.①④
5、③②A.①②③④C.①④②③答案C解析限制酶可在特定位点对DNA分子进行切割;DNA聚合酶在DNA分子复制时将脱氧核昔酸连接成脱氧核昔酸链;DNA连接酶可将限制酶切开的磷酸二酯键连接在一起;解旋酶的作用是将DNA双链解开螺旋,为复制或转录提供模板。2.如图是表达新基因用的质粒的示意图,若要将冃的基因插入到质粒上的A处,则切割基因时可用的是()HindIIIEcoRA.HmdTIlB.EcoRIC.EcoBD.PstI答案C解析A处有Ba加HI、EcoB、ClaI限制酶的切点,使用A〜D中的EcoB切割时,才能让目的基因插入到A处。p-归纳提升与DNA相关的五种酶的比较名称作用部
6、位作用结果限制酶磷酸二酯键将DNA切成两个片段DNA连接酶磷酸二酯键将两个DNA片段连接为一个DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯键将单个脱氧核昔酸依次连接到单链末端DNA(水解)酶磷酸二酯键将DNA片段水解为单个脱氧核昔酸解旋酶碱基对之间的氢键将双链DNA分子局部解旋为单链,形成两条长链命题点二载体的作用及特点分析1.下列关于载体的叙述中,错误的是()A.载体与目的基因结合后,实质上就是一个重组DNA分子A.对某种限制酶而言,载体最好只有一个切点,但还要有其他多种酶的切点B.目前常用的载体有质粒、入噬菌体的衍生物和动植物病毒C.载体具有某些标记基因,便于对其进行切割答案D解析载体必
7、须具备的条件有:①对受体细胞无害,不影响受体细胞正常的生命活动;②具有自我复制能力,或能整合到受体细胞的染色体DNA上,随染色体DNA的复制而同步复制;①具有一个至多个限制酶切点,以便目的基因可以插入到载体中;④带有特殊的标记基因,如抗生素抗性基因,以便于对外源基因是否导入进行检测;⑤载体DNA分子大小适合,以便于提取和进行体外操作。1.下面为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图,据图回答下列问题:71的基快I、插入位点氨节肯霉索抗性基因坂制蹶点、(l)a代表的物质和质粒的化学本质都是,二者还具有
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