第四章结果与讨论

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1、第四章結果與討論第一節黃酮類化合物受白兔、大白鼠及人糞便細菌之作用一、黃酮?受白兔、大白鼠及人糞便細菌之作用中藥中黃酮類主要以配醣體的形式存在，水溶性頗佳，一般中藥多使用水煎煮，因此黃酮?極易溶於傳統水煎劑中。然而，此些配醣體卻因為極性太高而無法經胃腸道吸收。本研究為更深入了解黃酮?的循環前代謝，並探討不同種動物間之差異，以各種動物糞便進行研究。Hesperidin、naringin、rutin及phellamurin均為黃酮?，目前文獻仍鮮有其原型可被吸收之報導。一般認為當此些配醣體抵達大腸後，一

2、面被腸(1)內菌水解出?元，一面被腸內菌所降解。Hesperidin、naringin、rutin及phellamurin經腸內菌作用後會轉變成hesperetin、naringenin、quercetin及neophellamuretin。本研究利用HPLC定量黃酮?元的經時變化，所採用之高效液相層析條件以乙?及0.1%磷酸溶液為移動相，採梯度沖提之方式，檢測波長為254nm，流速為1.0mL/min，以5,7-dimethoxycoumarin為內部標準品，其最終濃度為25.0µg/mL，於層析

3、圖中出現之位置無任何干擾。Hesperetin、naringenin、quercetin及neophellamuretin及內部標準品之滯留時間如Table1所示。有鑑於此等化合物在加熱的情況下會被酸水解成?元，因此本研究先探討人工胃液對此等化合物之影響。Fig.1~4顯示該四種黃酮?並未被水解出?元，表示於37℃下胃酸並未水解黃酮?。黃酮?受白兔、大白鼠及人糞便細菌作用後，其?元量的變化如Table2~5所示，濃度之經時變化如Fig.1~4所示。Hesperidin及rutin一接觸到人糞便細菌時

4、，就立刻被水解成?元，而後隨著時間之增加，?元量漸漸減少。Naringin在白兔、大白鼠及人糞便細菌中之作用情形較為相似。Phellamurin極易受到此三種糞便細菌之水解及降解，尤其是白兔糞便，1小時後就無法偵測到?元。87上述結果顯示，不同種動物糞便對黃酮?之作用差異不大，而hesperidin、naringin、rutin及phellamurin之間，因化學結構與物理化學性質的不同，其水解與降解的情況存在著差異。此些體循環前代謝的差異或許是影響生可用率的因素。本研究室曾探討之兔體內研究顯示口服

5、投予naringin225mg/kg，其結合態代謝物之平均最高血中濃度為4.4(14)µg/mL，然而口服投予phellamurin100mg/kg，其結合態代謝物之平均(227)最高血中濃度卻可達62.7µg/mL，推測可能因phellamurin較易被腸內菌水解成?元，亦或其?元極性較低易擴散進入腸細胞，而導致吸收程度較佳。二、異黃酮?受白兔、大白鼠及人糞便細菌之作用(228)Puerarin、daidzin及genistin均為異黃酮?。Kim等人將puerarin及daidzin分別置於人的

6、腸內菌中培養24小時，發現此二者均會轉變成(229,230)daidzein。Genistin於腸內菌作用下亦會轉變成?元genistein。本實驗探討白兔、大白鼠與人糞便之間對異黃酮?是否有代謝上的差異。本研究利用HPLC定量?元之經時變化，所採用之高效液相層析條件係以乙?：0.1%磷酸溶液（34：66,v/v）混液為移動相，流速為1.0mL/min，檢測波長254nm。以5,7-dimethoxycoumarin為內部標準品，其最終濃度為25.0µg/mL，於層析圖中出現之位置無任何之干擾。Da

7、idzein、genistein及內部標準品之滯留時間分別為4.6、8.7及12.6分鐘，整個分析過程只需時15分鐘。異黃酮?受白兔及大白鼠糞便細菌作用後，其?元的變化如Table6所示，濃度經時變化如Fig.5所示。結果顯示daidzin一接觸到白兔及大白鼠糞便時，立刻被水解成?元，隨著時間並未明顯減少。Genistin在白兔及大白鼠糞便細菌作用下，均產生genistein，白兔糞便培養下，8小時後還有55.7µg/mL，而genistein卻極易受到大白鼠糞便細菌之降解，8小時後只剩下5.5µg

8、/mL。藉由比較daidzein與genistein的降解速率，顯示5位置的OH基會增加異黃酮?元之降解。Puerarin於白兔、大白鼠及人糞便懸浮液中反應24小時，結果於此88(229)三種糞便中，皆無法測得任何daidzein。Kim等人的研究指出puerarin受人腸內菌作用後，daidzein會隨時間而緩慢產生，吾人研究與Kim等人的結果並不相符。Puerarin為C-glycoside，化學性質上無法以酸水解，本研究於糞便懸浮液中亦顯示無?可水解之。至於何種