db34t 2253-2014 水产品中硝基呋喃类代谢物残留的检测 胶体金免疫层析法

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1、ICS67.050B50DB34安徽省地方标准DB34/T2253—2014水产品中硝基呋喃类代谢物残留的检测—胶体金免疫层析法Detectionofnitrofuranmetabolitesresiduesinaquaticproducts-Colloidalgoldimmunochromatographicmethod文稿版次选择2014-12-17发布2015-01-17实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2253—2014前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由合肥市渔政监督管理站提

2、出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：合肥市畜牧水产技术推广中心、合肥市渔业协会、杭州南开日新生物技术有限公司。本标准起草人：赖年悦、孙德祥、桑丽雅、周作友、徐薇、陈友顺、杨锐、曹海、张军、夏俊华、陈元生、程定文、方凯、钱继银、桂淦、胡积清、戴靖、陈晓荣、徐丽、沈亭海、徐经云、张凯。IDB34/T2253—2014水产品中硝基呋喃类代谢物残留的检测-胶体金免疫层析法1范围本标准规定了水产品中硝基呋喃类代谢物残留的检测——胶体金免疫层析法的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、结果判断及表述、结

3、果确证的方法。本标准适用于鱼、甲鱼、龟肌肉组织和虾、蟹去壳、肠腺的可食用组织中呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）、呋喃西林的代谢物氨基脲（SEM）、呋喃它酮的代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）和呋喃妥因的代谢物1-氨基-乙内酰脲（AHD）的快速筛查检测。本方法呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃妥因代谢物的检出限均为1.0μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其

4、最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理本法为竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。样品中残留的硝基呋喃类代谢物在酸性条件下衍生，碱性条件下经乙酸乙酯萃取、正己烷去脂净化后，滴加在免疫胶体金快速检测板加样孔中，样品溶液以硝酸纤维素（NC）膜为载体，利用微孔膜的毛细管作用缓慢向另一端渗移，在移动过程中，样品溶液中的硝基呋喃类代谢物的衍生物与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，从而抑制了抗体和检测线上特异性结合抗原的结合，未被硝基呋喃类代谢物的衍

5、生物结合的抗体与检测线上的抗原反应，并通过胶体金的颜色而显示红色条带。用胶体金读卡仪或目测比较板/卡上控制线（C线）和检测线（T线）上红色条带的有无及颜色的相对深浅进行判定。当样品中的硝基呋喃类代谢物含量达到或超过本方法检出限时，检测线较控制线显色淡甚至无显色，判定为阳性。反之，当试样中的硝基呋喃类代谢物含量在本方法检出限以下或无残留时，检测线与控制线显色一致或偏深，判定为阴性。4试剂和材料4.1除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。4.2浓盐酸：质量分数≥37%4.3氢氧化钠（

6、NaOH）。4.4磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）。4.5二硝基苯甲醛（2-NP）。4.6甲醇（CH3OH）。4.7乙酸乙酯（C4H8O2）。1DB34/T2253—20144.8正己烷（C6H14）。4.91mol/L盐酸溶液：量取8.6mL浓盐酸，加蒸馏水定容至100mL。4.10衍生化试剂：称取0.15g二硝基苯甲醛，加甲醇100mL溶解，4℃避光保存。4.110.1mol/L磷酸氢二钾溶液：称22.8g磷酸氢二钾（4.4），加蒸馏水溶解，定容至1000mL。4.121mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢

7、氧化钠，加蒸馏水定容至100mL。4.13硝基呋喃类代谢物免疫胶体金快速检测试剂板4.13.1硝基呋喃类代谢物结合抗原：偶联率为1:10～1:20（载体蛋白：NPAOZ/NPSEM/NPAMOZ/NPAHD）。4.13.2抗硝基呋喃类代谢物的衍生物抗体：多抗或单抗。多抗效价应大于5000（间接ELISA法），或有效抗体含量应大于0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。单抗效价应大于15000（间接ELISA法），或有效抗体含量应大于0.5mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法

8、）。抗体相对亲和力应大于3.0×109（结合率下降50％时，相对应的抗体浓度的倒数）。4.13.3样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。4.13.4金释放垫：聚酯纤维片，免疫金释放时间小于5min，释放效率大于80％。4.13.5NC膜：4cm毛细管121s～149s。4.13.6吸水垫：滤纸或玻璃纤维或吸水纸。4.13.7背衬：PVC。4.13.8塑料