淋巴细胞的分离、计数

《淋巴细胞的分离、计数》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、淋巴细胞的分离、计数中山医学院免疫学教研室2013-04实验目的和要求掌握外周血单个核细胞分离的方法掌握细胞计数的方法实验原理外周血中细胞种类细胞密度红细胞和多形核白细胞1.092淋巴细胞和单核细胞（PBMC）1.075-1.092血小板1.030-1.035葡聚糖—泛影葡胺密度梯度离心法：根据外周血中各种血细胞比重不同使不同密度的细胞呈梯度分布，从而分离出PBMC。实验材料1.肝素抗凝血2.Hank’s液3.淋巴细胞分离液（F-H)4.水平离心机，加样枪5.显微镜，吸管6.细胞计数板，台盼蓝计数液实验方案

2、抽取外周血分离单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）（PBMC）细胞计数实验步骤肝素抗凝静脉血1.5ml加1.5mlHank’s液稀释置于2ml淋巴细胞分离液上(交界液面：一定不要打乱)稀释后的抗凝血淋巴细胞分离液注意：稀释的肝素抗凝血，沿管壁轻轻叠加于分离液上，使两者形成一个清晰地界面。用Hank’s液洗、离心(1000rpm，5min)重复2次血浆分层液红细胞粒细胞离心（2000rpm，25min）淋巴细胞与单核细胞层注意：细胞经离心分层后，缓慢小心吸取，勿打破形成的细胞层。用Hank’s液重悬细胞取10ul

3、细胞悬液与90ul白细胞计数液或台盼兰计数液混合取10ul于细胞计数板上细胞计数细胞计数板细胞计数原则：数上不数下，数左不数右长1mm宽1mm结果计算22个大方格内细胞总数单个核细胞浓度（细胞数/ml)×104×10=(稀释倍数）活细胞百分率=活细胞数细胞总数×100%细胞活力检测：（死细胞被染成蓝色，活细胞不着色）细胞数量：方法评价纯度在90%以上淋巴细胞约占90-95%细胞收获率可达80-90%活细胞百分率在95%以上密度梯度离心法分离外周血单个核细胞：细胞计数的仪器血细胞分析仪，临床常用装有自动显微镜

4、观察系统自动细胞计数仪Thanks!注意事项请将带血的试管，吸管收集放置于实验室后的红色消毒盆中。值日生负责收集加样枪，计数板，洗耳球，台盼蓝计数液，Hanks’液。打扫实验室卫生。