二甲双胍调控Nrf2对非小细胞肺癌EGCG和放射敏感性的影响与机制分析

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1、二甲双胍调控Nrf2对非小细胞肺癌EGCG及放射敏感性的影响及机制研究中文摘要二甲双胍调控Nrf2对非小细胞肺癌EGCG和放射敏感性的影响及机制研究中文摘要第一部分：二甲双胍增加非小细胞肺癌细胞A549对EGCG（表没食子儿茶素没食子酸酯）的敏感性目的研究二甲双胍对非小细胞肺癌A549细胞表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)敏感性的影响及其机制。方法首先利用MTT法和WesternBlot法检测不同非小细胞肺癌细胞株对EGCG的敏感性差异以及细胞株中HO-1表达水平的差异；采用MTT法检测二甲双胍能否增加EGCG对A549细

2、胞生长抑制；采用细胞凋亡试剂盒和ROS检测试剂盒明确二甲双胍和EGCG对A549细胞凋亡和ROS水平的影响；分别采用WesternBlot和免疫荧光检测二甲双胍和EGCG对HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影响及对Nrf2在细胞内亚分布的影响；通过分析基因芯片的结果和实时荧光定量PCR检测25对肺癌和正常肺组织中HO-1的表达水平了解正常细胞和肿瘤细胞中HO-1表达的差异，并采用MTT法分析EGCG对A549和正常肺上皮BEAS-2B细胞的影响。采用裸鼠皮下接种A549细胞的方法建立A549细胞裸鼠移植瘤模型；二甲双胍200μ

3、g/mL溶于饮用水给药，EGCG50mg/kg隔天腹腔注射给药。采用游标卡尺测量裸鼠移植瘤的大小。采用免疫组化检测裸鼠移植瘤中Nrf2水平的变化。结果四种不同的非小细胞肺癌细胞株中HO-1表达水平存在差异，A549中HO-1表达最高，同时A549对EGCG最为耐受。二甲双胍能抑制A549细胞中HO-1的蛋白水平，并且这种抑制效果存在浓度依赖性，0.4mmol/L的二甲双胍对A549生长没有抑制效果，但是能显著抑制HO-1的蛋白水平。0.4mmol/L的二甲双胍能显著增加EGCG对A549细胞的生长抑制，凋亡和ROS中文摘要二

4、甲双胍调控Nrf2对非小细胞肺癌EGCG和放射敏感性的影响及机制研究的水平。二甲双胍能通过抑制Nrf2的细胞核分布降低HO-1的水平。最后通过分析基因芯片的结果发现相比于肺癌组织，正常肺上皮中HO-1水平明显增高，且正常肺上皮BEAS-2B相比于A549对EGCG更为耐受。二甲双胍能增加EGCG对A549裸鼠移植瘤的抑制作用。EGCG能增加裸鼠移植瘤中Nrf2的水平，二甲双胍抑制EGCG增加Nrf2的效应。结论本研究表明，二甲双胍能抑制A549细胞中HO-1的蛋白水平，并且能通过诱导凋亡和ROS的产生增加EGCG对A549生

5、长的抑制。二甲双胍能够通过抑制细胞核内的Nrf2水平减少HO-1的水平。此外，正常肺上皮和肺癌中HO-1的表达存在差异，因此对EGCG的敏感性不同。二甲双胍联合EGCG可以为临床肿瘤治疗提供了一个新方案。关键词：二甲双胍（metformin）；表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)；NF-E2相关因子2（Nrf2）；血红素加氧酶-1(HO-1)；非小细胞肺癌（NSCLC）第二部分二甲双胍对非小细胞肺癌细胞A549细胞放射敏感性的影响和机制研究目的研究二甲双胍对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性的影响及其机制。方法采用克隆形成法

6、检测二甲双胍和X射线对A549克隆形成的影响；采用PI法检测二甲双胍和X射线对A549细胞周期的影响；采用细胞凋亡试剂盒检测二甲双胍和X射线对A549细胞凋亡的影响；分别采用WesternBlot和免疫荧光检测二甲双胍和X射线对HO-1蛋白及Nrf2蛋白水平的影响及对Nrf2在细胞内亚分布的影响。结果二甲双胍能抑制X射线对A549细胞克隆形成的抑制能力；二甲双胍能抑制S期细胞的比例，同时减少X射线诱导的G2/M期阻滞；二甲双胍能减少X射线导致的Nrf2细胞核转位。结论本研究表明，二甲双胍能增加X射线抑制A549细胞克隆形成的

7、能力，并且能通过改变A549的细胞周期并减少X射线诱导的G2/M期阻滞。此外，二甲双胍能够通过抑制X射线诱导的Nrf2细胞核转位抑制Nrf2信号通路。二甲双胍联合X射线可以为临床肿瘤治疗提供了一个新方案。关键词：二甲双胍（metformin）；NF-E2相关因子2（Nrf2）；非小细胞肺癌；II二甲双胍调控Nrf2对非小细胞肺癌EGCG及放射敏感性的影响及机制研究中文摘要放射敏感性作者：俞辰逍指导教师：焦旸英文摘要二甲双胍调控Nrf2对非小细胞肺癌EGCG和放射敏感性的影响及机制研究MetforminSensitizesNo

8、n-smallCellLungCancerCellstoEpigallocatechin-3-Gallate(EGCG)andIonizingRadiationTreatmentviaRegulatingNrf2AbstractPartIMetforminSensitizesNon-sma