《血清学实验技术》PPT课件

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1、第二十四章血清学试验第一节血清学反应概论概念：在体外进行的抗原抗体反应，一般采用血清进行，称为血清学反应Ag血清(Ab)Ag-Ab复合物pH7.0370C一、血清学反应的一般规律二、血清抗体的制备原则三、影响血清学反应的因素四、血清学反应的应用一、血清学反应的一般规律（一）抗原与抗体结合的胶体形状变化抗体在溶液中以胶体状态存在++++++--------------++++++范德华力抗原抗体互补空间关系有助于该力发挥作用。静电引力氨基与羧基氢键结合力大于范德华力疏水作用抗原抗体分子上非极性氨基酸，提供的作用力最大(二)抗原抗体作用的结合力比例适合才出现最强的反

2、应。沉淀反应抗原抗体反应的等价带:最适比时，抗原抗体结合充分，沉淀物形成快而多，上清中存在少量游离。带现象：如抗原或抗体过剩，其结合价不能相互饱和，则抗原与抗体仅能形成小分子的复合物，不出现肉眼可见的反应。（三）抗原抗体的结合比例前带后带非共价键结合，一定条件下可解离结合强度取决于特异性抗体Fab片段与抗原决定簇立体构型的吻合程度稀释和冻融可使复合物解离解离与否：1、亲和力；2、环境因素（pH、离子强度）（四）抗原与抗体结合的可逆性利用抗原抗体特异性结合反应的可逆性规律，建立亲和层析技术，纯化免疫纯的抗原或抗体。第一阶段：特异性结合；时间短，数秒到数分钟第二阶段

3、：可见反应阶段，表现为凝集、沉淀等可见反应；时间长，数分钟到数日（五）抗原抗体反应的阶段性二、血清抗体的制备原则1.免疫动物的选择选择动物时应考虑以下因素：①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来源与免疫动物种属差异越远，其免疫源性越强，免疫效果越好，而同种系或亲缘关系越近，免疫效果越差。②动物个体的选择。适龄、健康、体重符合要求的正常动物（以雄性为佳）；抗体需要量少时，选用家兔、豚鼠和鸡等小动物；抗体需要量大时，可选用绵羊、山羊、马、驴等大动物。2.抗原及佐剂(1)免疫原的剂量：免疫原的接种剂量按免疫原性的强弱、动物的个体状态、免疫时间、所要求的抗体特性来确定。首

4、次免疫时，剂量不宜过大或过小，以免产生免疫耐受或不能形成足够刺激。高特异性－低剂量短程免疫；高效价－大剂量长程免疫(2)免疫佐剂:某些物质与抗原一起或先于抗原注入机体，可增强机体对该抗原的特异性免疫应答或改变免疫应答类型，此类物质称为免疫佐剂(immunoadjuvant)，简称佐剂。佐剂的种类佐剂一般包括以下几类：①无机佐剂：如氢氧化铝、明钒等②生物性佐剂：如结核分枝杆菌、卡介苗、小棒状杆菌、百日咳杆菌、革兰阴性杆菌内毒素、霍乱毒素的B亚单位、胞壁酰二肽和细胞因子等；③人工合成佐剂：如双链多聚肌苷酸：胞苷酸（polyI：C）、双链多聚腺苷酸：尿苷酸（polyA

5、：U）；④油剂：如弗氏完全佐剂、花生油乳剂等；⑤纳米佐剂弗氏佐剂（Freund’sadjuvant）,分为弗氏不完全佐剂和完全佐剂两种：前者是由油剂（矿物油或花生油）和乳化剂（羊毛脂或吐温-80）按1：1～1：5比例混合而成；后者由弗氏不完全佐剂加卡介苗组成。在免疫动物时，先将弗氏佐剂与抗原等比混匀，制成“油包水”乳化液。佐剂与抗原混合乳化的方法：研磨法搅拌混合法佐剂的免疫生物学作用①增强抗原免疫原性：使无或微弱免疫原性的物质变成持久或强的免疫原；②增强机体对抗原刺激的反应性，提高初次应答和再次应答所产生的抗体滴度；③改变抗体类型，使产生抗体由IgM型转变为Ig

6、G型；④引起或增强迟发性超敏反应。佐剂的作用机制佐剂的作用机制归纳起来主要有如下几种：①可增强抗原的表面积和改变抗原活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性。②佐剂与抗原混合一起注入机体，可改变抗原的物理性状，形成抗原储存库，延长抗原在局部组织的滞留时间，有利于抗原的缓慢释放。③增强吞噬细胞的吞噬作用（被佐剂吸附的抗原易被吞噬细胞吞噬），促进对抗原的处理，刺激淋巴细胞增生，从而增强和扩大免疫应答的效应。3.免疫途径与免疫间隔时间免疫途径通常有皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结等，视不同的免疫方案而异。对于不易获取的宝贵抗原可采用淋巴结免疫法。免疫间隔时间是影响抗体

7、产生的重要因素，其中首次与第二次免疫的间隔时间尤为重要，一般以10～20天为佳，二次后间隔时间一般为7～10天，若间隔时间太长，则刺激减弱，抗体效价不高。4.免疫血清的保存1、4℃保存（6个月）2、低温保存（-70℃～-20℃，5年）3、真空干燥保存（5～10年）注意点：保存前需经除菌保存液含防腐剂避免反复冻融（分装）三、影响血清学反应的因素抗体的来源：不同动物的免疫血清反应性存在差异。家兔，等价带宽，抗原过量才出现可溶性免疫复合物抗体的浓度：相对抗原而言抗体的特异性和亲和力：早期抗体特异性较好，亲和力低晚期亲和力高类型复杂，反应性复杂单抗的特异性好但亲和力低，

8、不适用于低灵敏度的沉淀反