《疫血清学技术》PPT课件

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1、免疫血清学技术用于检测抗原或抗体的体外免疫反应技术或称免疫检测技术，这一类技术因一般都需用血清进行试验，通常称为免疫血清学反应或免疫血清学技术第四讲一、凝聚性试验抗原与相应抗体结合形成复合物，在有电解质存在下，相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或沉淀物，根据是否产生凝聚现象来判定相应抗体或抗原，称为凝聚性试验根据参与反应的抗原性质不同，分为由颗粒性抗原参与的凝集试验和由可溶性抗原参与的沉淀试验二大类（一）凝集试验细菌、红细胞等颗粒性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的凝

2、集团块，称为凝集试验(agglutinationtest)。参与凝集试验的抗体主要为IgG、IgM。凝集试验可用于检测抗原或抗体。凝集试验可根据抗原的性质、反应的方式分为直接凝集试验（简称凝集试验）和间接凝集试验。直接凝集试验颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集现象的试验称作直接凝集试验(directagglutinationtest)玻片法：定性试验，适用于新分离细菌的鉴定或分型试管法：定量试验，检测待测血清中是否存在相应抗体和测定抗体含量间接凝集试验将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的，

3、一定大小的不溶性颗粒(统称为载体颗粒)的表面，然后与相应抗体(或抗原)作用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现的特异性凝集反应称为间接凝集反应。敏感性高，但特异性较差可溶性抗原细菌、立克次氏体及病毒的可溶性抗原原虫、吸虫、丝虫的浸出液动物的可溶性物质激素及各种组织器官浸出液植物性蛋白质如花粉浸出液等某些细菌的可溶性多糖常用的载体颗粒有红细胞(“O”型人红细胞，羊红细胞)、聚苯乙烯胶乳颗粒，白陶土、离子交换树脂、火棉胶致敏颗粒：载体吸附了可溶性抗原间接血凝试验将抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体，在

4、与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集，称为间接血凝试验(passiveheamagglutinationassay,PHA)将抗体致敏于红细胞表面，用以检测检样本中相应抗原，致敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝集，称为反向间接血凝试验(reversepassiveheamagglutinationassay,RPHA)。乳胶凝集试验聚苯乙烯乳胶是利用化工原料聚苯乙稀经过乳液聚合得到的高分子乳胶液，乳胶微球直径约0.8m。对蛋白质、核酸等高分子物质具有良好的吸附性能。利用聚苯乙烯乳胶的微球作载体，以吸附某些

5、抗原(或抗体)，即能用以检测相应的抗体(或抗原)，称为乳胶凝集反应。(latexagglutinationtest)协同凝集试验葡萄球菌A蛋白(staphylococalproteinA，简称SPA)是大多数金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与多种哺乳动物IgG分子的Fc片结合。SPA与IgG结合后，其Fab片暴露于外，并保持其抗体活性。当此被覆着特异性抗体的葡萄球菌与相应的抗原结合时，就可互相连结引起协同凝集反应，简称COAG。（二）沉淀试验可溶性抗原(如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶

6、性抗原、血清、组织浸出液等)与相应抗体结合，在适量电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验(precipitationtest)。抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，抗原分子较小，单位体积内所含的量多，与抗体结合的总面积大，故在作定量试验时，为了不使过剩，通常稀释抗原，并以抗原稀释度作为沉淀试验效价。参加沉淀试验的抗原称沉淀原，抗体称为沉淀素。环状沉淀试验在小口径试管内先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待检抗原于血清表面，使之成为分界清晰的两层数分钟后，两层液面交界处出现白色环状沉淀，即为阳性

7、反应。本法主要用于抗原的定性试验，如炭疽病的诊断(Ascoli试验)。试验时出现白色沉淀带的最高抗原稀释倍数，即为血清的沉淀价。琼脂免疫扩散试验琼脂的作用抗原抗体在琼脂凝胶中扩散，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应，形成肉眼可见的沉淀带，此种反应称为琼脂免疫扩散，又简称琼脂扩散和免疫扩散。单向单扩散单向双扩散双向单扩散双向双扩散免疫电泳技术免疫电泳对流免疫电泳火箭免疫电泳二、标记抗体技术抗体、抗原分子小，在含量低时形成的抗原抗体复合物是不可见的。将特殊物质标记在抗体分子上，通过检测标记分子来显示抗

8、原抗体复合物的存在，即根据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感性建立的技术，称为标记抗体技术(labelledantibodytechnique)。高敏感性的标记分子荧光素酶分子放射性同位素荧光抗体技术酶标抗体技术同位素标记技术（一）荧光抗体标记技术fluorescent-labelledantibodytechnique是指用荧光素对抗体或抗原进行标记，然后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析示踪相应的抗原或抗体的方法。荧光色素是能够产生明显荧光，并能作