《动物细胞制药》PPT课件

《《动物细胞制药》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第五章动物细胞制药第一节概述1、动物细胞培养的定义动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。2、动物细胞培养的历史（1）开始----1907，Harrison用蝌蚪的髓管放于一滴淋巴液内，培养出神经元。（2）成熟----以人的肿瘤细胞与组织为材料建立的各种细胞系，如Hela细胞系。3、动物细胞培养的优点（1）细胞经培养后形成的细胞系和细胞株，特征均一。（2）理化环境可控制，培养物可直接被观测。（3）提供大量均一的

2、细胞供制备用。（4）便于进行人工筛选。（5）结合显微影相技术，可观察细胞代谢活动和反应。目前，动物细胞培养技术已经广泛应用于病毒学，免疫学，遗传学，肿瘤学，分化及发育，细胞毒理试验，生物技术等各个领域。4、动物细胞培养的类别1、动物组织培养2、动物细胞培养（1）细胞团块单层培养（2）单细胞克隆株培养3、原代细胞培养（1）初代培养（2）细胞株确立培养4、细胞继代培养第二节动物细胞的生理特点一、动物细胞的形态适应功能,形态各异。离体培养细胞分两类：贴壁细胞悬浮细胞⒈贴壁细胞生长须有贴附的支持物表面，自身分泌或培养基中提供的贴附因子才

3、能在该表面上生长。两种形态：成纤维细胞型上皮细胞型动物细胞贴壁生长特性⒉悬浮细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。⒊兼性贴壁细胞生长不严格依赖支持物。如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。（2）超净工作台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。100级超净工作台指标：（≥0.5цm≤3.5粒/L）培养器具培养瓶培养板培养皿（4）倒置显微镜（5）纯化水装置二、动物细胞的生理特点⒈细胞的分裂周期长细胞分裂时间为12～48h，细胞的分裂周期=间期+分裂期间期（

4、G1+S+G2）分裂期（M）G1期：4～6h合成DNA聚合酶RNA合成S期：6～8hDNA合成G2期：2～5hDNA量加倍,RNA合成M期：0.5～1h染色体分裂⒉细胞生长需贴附于基质,并有接触抑制现象。⒊正常二倍体细胞的生长寿命是有限的。⑴原代培养⑵有限细胞系⑶无限细胞系⒋动物细胞对周围环境要求十分严格，对理化因素很敏感：如：渗透压、pH、离子浓度、剪切力、微量元素等。⒌动物细胞对培养基要求高：必需氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、葡萄糖、细胞生长因子、贴壁因子等。⒍动物细胞蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同。动物细胞蛋白质

5、的合成部位：⑴游离核糖体⑵粗面内质网的核糖体游离核糖体合成蛋白质用于细胞质基质内。粗面内质网的核糖体合成蛋白质是分泌的，并在膜中整合修饰为蛋白多糖、糖蛋白等，由粗面内质网提供膜形成大囊泡分泌出胞外。动物细胞生产药物缺点:培养条件高、成本贵、产量低。优点:分泌胞外、纯化方便、翻译后修饰糖基化，与天然产品一致。第三节生产用动物细胞的要求和获得一、生产用动物细胞的要求⒈原代细胞⒉二倍体细胞系⒊转化细胞系二、生产用动物细胞的获得⒈原代细胞是直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。需要大量动物，费钱费劳力。鸡胚

6、细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、淋巴细胞。⒈原代细胞培养定义：从新鲜供体取得组织细胞后在体外进行首次培养，一般持续1－4周。步骤：取材---组织分离---培养⒉二倍体细胞系原代细胞经过传代筛选克隆，从多种细胞成分的组织中，挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。二倍体细胞的培养意义二倍体细胞：（1）具有二倍性染色体（2n），染色体核型正常。（2）培养条件下只具有有限的生命力，不能进行无限期的分裂繁殖。（3）无致癌性。培养意义：二倍体细胞保留着在位组织正常的细胞性状。（1）可用于生产疫苗、尿激酶、干扰素等药物的生产。（2）也可用于细胞

7、遗传学、细胞分化及衰老的研究、以及药物的细胞毒性、环境污染的细胞学检测。⒊转化细胞系通过某个转化过程形成的，常由于染色体断裂变成异倍体，失去正常细胞特点，而获得无限增殖能力。转化过程可以是自发的，和人工的，从肿瘤组织中。三、生产常用动物细胞的特性MRC-5：从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。核型为2n=46。有限寿命42～46代。培养基用加小牛血清，同工酶G6PDB型。培养的该细胞株分泌的组织型纤溶酶原激活因子（t-PA）用于治疗心肌梗塞，脑栓塞、肺栓塞等血栓病。还可以治疗骨髓移植或化疗中出现的中性粒细胞减少的粒细胞集落

8、刺激因子等疾病。BHK-21:从5只无性别的生长1天的地鼠幼鼠肾脏中分离的;成纤维样细胞,核型为2n=44;培养基为DMEM加7%胎牛血清。用于增殖病毒，包括多瘤病毒、口蹄疫病毒、狂犬病毒等并制作疫苗，现已用于工程细胞构建，表达重组凝血因子Ⅷ已投放市场，用于治疗