HPLC的保养和故障排除液相应用

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1、HPLC的保养和故障排除HPLC的日常操作条件最好是恒温、恒湿温度：15—30℃相对湿度<80%房间应有良好的通风空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器避免光线直射远离高电干扰、高振动设备泵的使用与维护注意事项防止任何固体微粒进入泵体（0.2um或0.45um的微孔滤膜过滤）流动相不应含有任何腐蚀性特质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、密封圈，最终产生漏液输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力流动相应先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性流动相的选择采用“HPLC”级溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相

2、匹配溶剂的等级HPLC级优级纯分析纯溶剂等级微量分析、梯度洗脱都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒)优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质溶剂纯度的影响溶剂中的杂质会导致出现“鬼峰”，特别是梯度解吸时注意：只能使用色谱级的溶剂!不能使用旧的或未经过滤的缓冲溶液缓冲液的使用缓冲液的使用使用前必须过滤使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:第二天接着用：用20%甲醇：80%水冲洗20-30分钟隔几天再用：用甲醇：水冲洗后，再用纯甲醇冲洗易受到细菌和霉菌的影响不能直接用有机溶剂冲洗流动相的过滤

3、过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其在使用无机盐配制的缓冲液时过滤膜种类水系过滤膜水系滤膜严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解有机系过滤膜脱气目的：除去流动相中因溶解或混合而产生的气泡产生原因：温度上升压力下降溶剂混合流动相的脱气流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯容器中，不能贮存在塑料容器中。容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应临用现制。容器应定期清洗，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。流动相的贮存流动相过滤头产生的问题故障特征“鬼峰”(由已被污染的过滤头造成)保留

4、时间不断改变(由于过滤头堵塞或部分堵塞)清洗步骤：1.水2.稀硝酸3.水4.异丙醇5.水(超声波清洗)流路中形成气泡引起的问题改变保留时间和峰面积流动相中形成气泡对液流的不良影响泵中形成气泡使液流波动峰变形柱中气泡形成和累积使流动相绕流尖峰或锯齿状噪声检测池中气泡形成和累积产生基线噪声1.使用流动相溶解样品--减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要--保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀2.进样前最好使用0.45um的膜进行过滤如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤样品处理梯度洗脱优点：可提高分离度、缩短分离时间和提高分离精度注意事项：溶剂的

5、纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差，进行样品之前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰。梯度混合的溶剂互溶性要好梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）每次梯度洗脱之后要对色谱柱进行充分的平衡。梯度洗脱溶剂混合产生的问题流动相中所使用的不同溶剂必须互溶流动相中溶剂不互溶会导致:1.基线漂移，2.保留时间的重现性差，3.出现肩峰和“鬼峰”的问题.混合器低压梯度比例阀高压梯度低压梯度脱气机高压/低压梯度系统高压梯度系统梯度准确度好系统复杂(需两台或三台泵)低压梯度系统系统简单需

6、在线脱气机存在时间滞后效应高压/低压梯度系统输液泵发生故障及相应排除措施故障可能原因解决办法无流动相流出，又无压力指示泵内有大量气体打开泄压阀，以较大流量（5mL/min)运转，密封圈损坏更换压力和流量不稳有气泡打开泄压阀，以较大流量（5mL/min)运转，单向阀内有异物稀硝酸超声清洗压力高堵压力低漏手动进样器操作注意点：1）样品溶液必须用0.45um的滤膜过滤2）进样时，进样针应插到底，不使用时将针头留在进样器内3）进样应使用液相色谱专用平头进样针4）转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置5）样品溶液pH小于10,常用密封垫的材质适用pH<10,否则换特氟隆材质的密封垫pH

7、10-13定子转子针头密封垫弹簧不锈钢套进样器的保养进样器的保养进样体积过大的进样体积会导致产生宽峰或峰形不对称通常引起色谱柱过载或超出检测器的检测限是由于样品浓度过高而不是体积的问题注意：使用微径柱时，必须保证柱子不要过载柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动柱的保养8945612370xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx00000000LC-10AD:::::::输液时不要打开排液阀当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净要注意流动相的脱气避免