液相色谱hplc的正确使用和科学保养

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1、液相色谱HPLC的正确使用和科学保养1、保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洗；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。2、定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器，保持过滤器畅通无阻。3、使用HPLC液相试剂和新蒸二次蒸馆水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02um滤膜过滤）。对流动相一定要脱气。4、每天开始使用HPLC液相仪器，注意放空排气，确保HPLC液和泵头、HPLC流动池以及HPLC其它流路系统中无气泡存在。5、珍惜保护HPLC液相色谱柱

2、，避免HPLC柱头突然产牛大的波动，扰动损伤柱床。如避免HPLC泵启动过速、HPLC升压过快、HPLC样品阀搬动过慢所造成的HPLC柱压人的波动。6、采用HPLC保护（警戒）柱，延长HPLC柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头，造成HPLC柱压升高，HPLC柱效下降，峰形变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新HPLC保护柱。7、避免HPLC超负荷进样，对250X4.6mm的柱子，绝对进样量应不超过100ug。在灵敏度允许的前提下，应尽虽将试样浓度降低，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HPLC柱性能持久良好的重要举

3、措之一。8、经常用强溶剂冲洗HPLC柱子，将HPLC柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用界丙醇■■二氯甲烷（1：1）冲洗，正相（硅胶柱）用纯甲醇或开丙醇冲洗，时间均不少于lh。9、做完试验，及时用适当溶剂冲洗HPLC柱了和HPLC进样阀，尤其是对过夜的HPLC柱了和HPLC进样阀，一定要用足量的水彻底洗净其中的盐类、缓冲液，再用甲醇或乙睛冲洗，并保存在乙月青中。正相柱保存在非极性有机溶剂（如己烷）中。10、以硅胶为基质的HPLC柱子，如018、C・8等，要控制好流动和的pH值，一般不要低于2.5,不高于7.（）。11、尽量用

4、流动相溶解样品，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。12、对于阻塞或受伤严重的HPLC柱子，必要吋，可卸下不锈钢滤板，超声洗去滤板阻塞物，对塌陷污染的HPLC柱床进行清除、填充、修补工作，此举可使柱效恢复到一定程度（80%）,有继续使用的价值。13、HPLC色谱仪检测器输出与积分仪（处理机）要匹配，要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。将适宜的进样屋和合适的参数结介起来，使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。14、用HPLC分析酸碱性物质，由于吸附作用（次级保留）使峰开拖

5、尾。加入改良剂可以大大改善峰形，提高积分的准确度。一般规则是：（1）分析酸性物质，可加入1%有醋酸。（2）分析碱性物质，可加入10-20mmol/L三乙胺。（3）酸碱物质混为-•体，可同吋加入1%的醋酸和10-20mmol/L三乙胺。液相流动相中往往含少量盐，请教下盐在流动相中所起的作用是什么？建立一个新方法时，如果没有和关文献参考，哪自己该如何來选择盐，用何种盐比较好？浓度多大为好？有没有相关判定依据呢？在液相屮经常会用到的流动相，一般是弱酸性物质，就用弱酸性流动相，碱性用弱碱性流动相，注意用酸或碱后的流动相PH值，看看

6、你的柱子的PH使用范围，一般是2〜8,但是不会用到2,和8,—般是3或7左右，具体问题具体分析，你在做Z前多查点资料，这个是没有什么具体的答案的，前人的经验很重要。改善峰形，抑制拖尾等现象。-•般要根据化合物的结构來确定。例如有竣基的话一般加0.05%或0.1%的三氟乙酸，冇碱性集团的话一般加0.05%的三乙胺。1.使用前的处理：在使用缓冲盐作流动和之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱,直至基线平稳。原则上,用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于冲洗用的流动相屮不含缓冲盐。理由：

7、缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时）流动相进行分析时，如果分析前色谱柱小用于保存色谱柱的流动相中含水的比例和对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水乂不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积卜•來，这将可能导致上述对色谱柱的损害。1.使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min,直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内

8、不使用，要长期保存，则需再加。Q:我现在正在做磺胺氯毗嗪在鸡叮食纽织屮药物残留检测，磺胺氯毗嗪的标准品是磺胺氯毗嗪钠，磺胺氯毗嗪钠溶于水呈弱碱性。目询我用C-18柱进行色谱分析，我先用甲醇：超纯水：乙酸=30：69：1的流动相来进行上样,结果出峰时间为2分钟左右，而且峰形也不好,然后我按照10%递减的原