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1、·608·ChinJNosocomiolVol.15No.62005·论著·高耐庆大霉素粪肠球菌质粒接合转移试验的方法探讨刘志远,许淑珍,马纪平(首都医科大学附属北京友谊医院,北京100050)摘要:目的筛选出较好的高耐庆大霉素粪肠球菌质粒接合转移的试验方法。方法使用NCCLS推荐的琼脂稀释法筛选临床分离36株高耐庆大霉素(HLGR)粪肠球菌,质粒接合转移试验采用肉汤接合法和滤膜接合法。结果36株粪肠球菌用普通肉汤(NB)、普通肉汤加马血清(NBH)、心脑浸液(BHI)、心脑浸液加马血清(BHIH)4种培养基作为接合前及接合过程培养介质,HLGR接合转移率分别为
2、50%、75%、89%、89%,滤膜接合法转移率达到100%,所形成的HLGR接合子也不同程度的获得了对其他抗菌药物的耐药性。结论采用BHI或BHI加马血清的肉汤培养基接合转移效果较好,结果一致,滤膜接合法可获得更高的转移通过率。关键词:粪肠球菌;耐药性;接合转移;庆大霉素中图分类号:R37811文献标识码:A文章编号:100524529(2005)0620608203PlasmidConjugationMethodforHighLevelGentamicinResistantEnterococcusLIUZhi2yuan,XUShu2zhen,MAJi2pin
3、g(BeijingFriendshipHospitalAffiliatedtoCapitalUniversityofMedicalScience,Beijing100050,China)Abstract:OBJECTIVETochoosethebestmethodsofconjugationexperimentforhighlevelgentamicinresistant(HLGR)Enterococcusfaecalis.METHODSConjugationwasperformedbybrothmatingandfiltermatingmethodandits
4、resultswerecomparedwithotherfourculturemedia.RESULTSTransferratesofHLGRplasmidfrom36strainsofE.faecalistorecipientstrainJH222inNB,NBwithhorseserum,BHI,andBHIwithhorseserumwere50%(18/36),75%(27/36),89%(32/36)and89%(32/36),respectively,androseupto100%(36/36)byfiltermatingmethod.CONCLUS
5、IONSBetterresultsareobtainedinconjugationexperimentsinBHIandBHIbrothwithhorseserum.Preferabletransferrateisacquiredbyfiltermatingmethod.Keywords:Enterococcusfaecalis;Resistance;Conjugation;Gentamicin[1]肠球菌是医院感染的重要病原菌,对多种抗111材料菌药物产生耐药性,而且耐药菌株不断增加,质粒接11111菌株(1)供体菌:36株高耐庆大霉素合转移是导致肠球菌的庆大
6、霉素等抗菌药物耐药基(HLGR)粪肠球菌均来自北京友谊医院的临床标因转移、耐药性播散的重要原因,深入研究接合转移本,所有菌株的利福平MIC值均<32μg/ml。(2)试验有助于了解肠球菌耐药性的产生机理。我们研受体菌:粪肠球菌JH222(由美国密歇根大学Don究了不同培养基和不同转移方法对粪肠球菌质粒转B.Clewell赠送,利福平MIC>50μg/ml,对庆大霉移试验结果的影响,并对接合前后菌株的耐药性进素、链霉素、青霉素、氨苄西林、四环素、红霉素、氯霉行了分析。素敏感)。(3)质控菌株:粪肠球菌ATCC29212(非HLGR)、ATCC51299(HLGR)
7、。1材料与方法11112抗菌药物庆大霉素(GEN)、链霉素(STR)、青霉素(PEN)、利福平(RIF)、氨苄西林收稿日期:2004210216;修回日期:2005201228(AMP)、四环素(TET)、红霉素(ERY)、氯霉素基金项目:北京市自然科学基金资助项目(7012013)(CHL)标准品购自中国生物药品检定所。通讯作者:许淑珍,E2mail:chen_juncai@sina.com11113培养基(1)普通肉汤(NB)、普通肉汤加中华医院感染学杂志2005年第15卷第6期·609·5%马血清(NBH):普通肉汤配方:牛肉粉10g、牛肉2结果胨10g、
8、K2HPO4·3H2O0
