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1、中华病理学杂志2006年4月第35卷第4期ChinJPathol,April2006,Vol35,No.4·197··专家论坛·流式细胞分析技术在淋巴瘤诊断中的应用杨凡周小鸽流式细胞分析技术(flowcytometry,FCM)是淋巴瘤诊断以因地制宜决定使用FCM的临床指征。的一个重要工具。现代医学的迅猛发展使诊断学在整个临1.FCM用于淋巴结或组织活检的指征:淋巴结、黏膜、床医学中所占的比重逐渐增大,用于诊断的新学科、新技术皮肤和其他部位有临床疑似或病理组织形态提示淋巴瘤。也日益增多,如何将各种
2、彼此独立的诊断资料加以综合分析2.FCM用于外周血和骨髓的指征:外周血淋巴细胞增从中得到对于临床治疗有用的信息是对现代医学的重大挑多、骨髓淋巴细胞和(或)浆细胞增多、未知异常细胞、血细战。在淋巴及造血系统疾病的诊治中,常规血液学(包括涂胞减少或有淋巴结和脾肿大、淋巴瘤的临床分期、监测治疗片)、病理学(包括淋巴组织和骨髓的穿刺、活检)、免疫分型反应和微小病变的检测。[包括FCM和免疫组织化学(IHC)]、细胞遗传学和分子生3.FCM用于体液的指征:淋巴细胞和(或)浆细胞增多、物学等等构成诊断的基础。
3、如能将其中的各部分有效的加未知异常细胞、有已知或疑似淋巴系统肿瘤。以整合便可以最大限度地互补,最大限度地避免不必要的重二、B细胞淋巴瘤的分析叠,将正确的诊断信息及时提供给临床。病理医生处于整B细胞淋巴瘤的主要特征有免疫球蛋白轻链限制(又称个诊断网络的中心,对于这一领域诊断信息的整合有着义不克隆性或单克隆性),即仅有两种轻链(κ、λ)中的一种存在,容辞的责任。笔者根据自己的工作经验,就FCM在淋巴瘤正常抗原的丧失和异常抗原的出现。B细胞淋巴瘤是来源诊断中的应用作如下介绍。于单个B细胞株的克隆性增生,
4、绝大多数B细胞淋巴瘤是一、使用FCM的临床指征成熟B细胞的克隆性增生。由于在这一分化阶段B细胞已FCM可以发挥最大优势的领域是细针穿刺(FNA)以及具备表达细胞膜表面免疫球蛋白的能力,而且所有瘤细胞都各种体液、血液和骨髓的检查。FNA加FCM对于淋巴瘤的来源于一个共同的B细胞株,瘤细胞表面球蛋白轻链的表达[1]诊断有效率可达75%～90%,就是说绝大多数患者经过就被限制在其中的一种(κ或者λ)。此为克隆性或单克隆FNA检查后可以不必活检。要注意的是FNA/FCM阴性并性。与此相反,在良性B细胞增生
5、时,增生的B细胞来源于不等于良性。根据具体情况进一步活检仍然有必要。对于不同的B细胞株,其表面免疫球蛋白轻链的表达有κ,也有已经决定做活检的患者,FCM可以辅助淋巴瘤/白血病的诊λ。这样一来,只要1个B细胞群有轻链表达限制就要考虑[226]断、分类以及微量病变的检测。一个全面的诊断除了结为B细胞淋巴瘤的可能。由于这个原因,有无免疫球蛋白轻合病理组织学分析外还要结合病史、分析实验室报告和根据链表达限制是FCM在B细胞瘤分析中最重要的指标之一。具体情况选择作基因和分子生物学检查。FCM与常规病理值得注
6、意的是,浆细胞肿瘤,前B细胞(precursorB2cell)肿瘤检查、IHC、聚合酶链反应(PCR)等相比有三个比较突出的不表达细胞表面免疫球蛋白。在高度恶性淋巴瘤中,细胞表优点:(1)快:几小时内可以出报告。其他方法通常需要一面免疫球蛋白的表达也会减少甚至不表达。另外,NK细胞、到数天。(2)高通量:一次可以检查上万个细胞,PCR的测活化的T细胞、单核/巨噬细胞,还有粒细胞会非特异性地与量是以整个样品为单位,FCM的测量是以样品中的每一个血浆中的免疫球蛋白结合(吸附或通过Fc受体),造成表达细
7、胞为单位。(3)多参数分析:IHC一般只能做一个染色,在表面免疫球蛋白的假象。如果同时有单克隆血浆免疫球蛋技术上双重或多重染色有很多困难。FCM普遍可以做三重白增高,更会造成克隆性B细胞群的误判,好在这种非特异到四重染色加上两个光学指标一般可以做5～6个参数的分性结合可以通过适当加温后清洗去除。克隆性B细胞群还[7]析。上世纪70年代后期FCM刚开始用于淋巴瘤诊断时主会有细胞大小和其他抗原表达的异常。通过寻找这些异要是作细胞DNA分析。FCM与细胞免疫学的结合是FCM常特征再结合轻链限制,FCM可
8、以确认微量瘤细胞群使其发展的一个里程碑。目前FCM最主要是做细胞表面抗原分灵敏度接近,有时甚至超过常规PCR扩增法测定免疫球蛋析,有时也需要做细胞内抗原分析。细胞DNA分析在现代白基因克隆性。FCM分析中仍然占有一席之地。根据这些特点,用户便可FCM测克隆性B细胞群的方法是在1个或2个试管中同时加入广谱B细胞抗体(CD19、CD20)和抗κ/抗λ抗体。作者单位:DepartmentofPathology,ImmunologyandLaboratory如条件允许,还可加入针对性B细胞
