多参数流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用

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1、多参数流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用作者：陆伟，丁润生，姜胜华，陈秀芳【摘要】　　目的：探讨多参数流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的诊断价值。方法：对临床疑似淋巴瘤患者的30份淋巴结行病理学常规及免疫组化检查，已确诊NHL患者的71份骨髓和血液标本行常规细胞形态及组化染色。对所有标本制备单个细胞悬液，进行多参数流式细胞术（FCM）免疫表型分析。结果：（1）淋巴结常规病理中5例误诊或无法分类的病例，经FCM检测诊断明确。通过流式细胞免疫表型分析与淋巴结病理诊断相结合，准确率由78.6%（22/28例）提高到96.

2、4%(27/28例)；（2）49例NHL患者骨髓形态学经FCM的免疫表型分析获得进一步确诊和分型。同时，流式细胞免疫表型分析使NHL骨髓浸润检测的阳性率提高了22.7%。结论：FCM能进一步明确NHL和NHL骨髓浸润的诊断与鉴别诊断，提高诊断的准确率。【关键词】非霍奇金淋巴瘤流式细胞术免疫表型　　[Abstract]Objective：ToinvestigatethevalueofmultipleparameterflowcytometryindiagnosisofNon-Hodgkin'slymphoma（NHL）.Met

3、hods:30lymphnodesfrompatientswithsuspectedlymphoidmalignanciesweretestedbypathologicaland7immunohistochemicalmethods,71samplesofbonemarrowfromconfirmedlymphoidmalignanciesweretestedbyroutinemorphologyandhistochemicalstaining.AllsampleswereanalyzedbyFCMinsuspendedsi

4、nglecell.Results:（1）Fiveof28lymphnodes,whichfailedtobediagnosedbyroutinemethods,weredeterminedbyflowcytometricimmunophenotypeanalysis.FCMcombindwithpathologicalmethodwouldraisetheaccuracy,whichraisedfrom78.6%to96.4%;（2）Immunophenetypeof49casesofNHLwasfurtherconfirm

5、edbyFCM.ThepositiverateofNHLwithbonemarrowinvolvementwasraised22.7%,comparedwithroutinemorphology.Conclusion:MultipleparameteranalysisbyFCMcanfurtherascertainthediagnosisanddifferentialdiagnosisofNHLandNHLwithbonemarrowinvolvement.Itcanraisethediagnosisaccuracy.　　[

6、Keywords]Non-Hodgkin'slymphoma;Flowcytometry；Immunophenotype　　淋巴瘤诊断方法包括病理形态、免疫组化、细胞遗传学和基因诊断，目前常用的是病理形态学诊断和免疫组化。而免疫组化操作技术复杂，耗时长。要达到理想的诊断和鉴别诊断必须依赖新的技术方法[1]。我们将流式细胞术（flowcytometry，7FCM）用于淋巴肿瘤细胞的生物学特性分析，旨在提高恶性淋巴瘤诊断的效率和准确率，为快速、准确诊断与鉴别诊断淋巴瘤提供客观检测指标。　　1材料与方法　　1.1标本来源30份颈部

7、或腋窝淋巴结标本来自2004年5月~2007年12月于本院门诊就诊或住院的疑似淋巴瘤患者。71份骨髓标本来自已确诊的非霍奇金淋巴瘤患者，其中男50例，女21例，中位年龄为48岁。　　1.2方法　　1.2.1形态学检查对临床疑似淋巴瘤患者30份淋巴结作病理形态学和免疫组化染色检查，选择的单抗有CD5、CD3、TDT、CD10、CD20、CD79a、LCA、UCHL-1、Bcl-2等。71份骨髓涂片经瑞氏及组化染色，行形态学检查。　　1.2.2流式细胞仪检测7所有标本均行流式细胞术免疫表型分析。淋巴结采用机械剪切法制备细胞悬液，

8、骨髓标本以Ficoll液分离单个核细胞。按FCM表面抗原和胞内抗原常规方法标记。用于免疫表型分析的单抗包括B细胞系的CD19、CD10、CD20、CD22、Kappa、Lambda；T/NK系的CD5、CD7、CD2、CD16、CD56、CD57、CD3、CD4、CD8、TCRαβ、TCR