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《高效液相色谱串联质谱测定蜂蜜蜂王浆中氯霉素残留》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第33卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第12期2005年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1767～1770高效液相色谱串联质谱测定蜂蜜、蜂王浆中氯霉素残留3谢文丁慧瑛章晓氡郑自强奚君阳俞春燕(浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心,杭州310012)摘要前处理方法包括添加同位素内标氯霉素2d5和采用10%偏磷酸沉淀蜂王浆产品中的蛋白质,上清液经乙酸乙酯提取,自制硅胶柱和Oasis小柱净化。净化后的提取溶液用高效液相色谱2电喷雾电离质谱检测,多反应监测3对离子(
2、321.0/256.9、321.0/194.0、321.0/175.8)。该方法对不同基质样品的加标回收率为91%～107%;相对标准偏差小于10%;蜂蜜和蜂王浆的方法检出限分别为0.1μg/kg和0.2μg/kg。关键词高效液相色谱串联二级质谱,蜂蜜,蜂王浆,氯霉素残留,同位素内标氯霉素2d51引言氯霉素(chloramphenicol,CAP)是一种高效广谱的抗生素,对各种好氧和厌氧微生物都有活性。它曾被用于家畜和家禽疾病的预防和治疗,它在动物性食品中残留的潜在危害就是对人骨髓造血功能造[1～3]成严重损害,
3、从而引起人的粒细胞缺乏病,再生障碍性贫血和溶血性贫血,严重者可致死。FAO/WAO规定食品中氯霉素的残留量不得检出,欧盟(EEC)96/23指令中把CAP列入禁用药,并规定氯霉素MRPL(minimumrequiredperformancelimits)值为0.3μg/kg。随着科学技术的进步,欧盟对进口动物源产品中的氯霉素的检出限量不断降低,甚至禁止中国的某些动物源产品的进口,同时蜂产品中氯霉素残留的检测又是动物源产品检测中的难点,因此蜂产品中氯霉素的检测变得尤为重要。文献报道用气相色谱(GC)、气相色谱质谱(
4、GC2MS)测定动物源产品中CAP,这些方法应用于蜂产品中氯霉素的检测,存在检出限难以达到要求、背景干扰或样品净化不完全以及衍生化难等问题。ELISA作为筛选方法,在蜂产品中氯霉素残留的最低检出限达到0.1μg/kg,但是对于阳性样品需要与之相对应的确证方法。文献[4、8]报道关于蜂蜜中氯霉素残留量的检测方法,分别采用高效液相色谱(HPLC)和GC2MS,尚未有蜂王浆中氯霉素残留量检测方法的报道。随着LC2MS/MS技术发展的日趋成熟,该方法被越来越多的应用于测定和确证动物源产品中氯霉素的残留量。本实验提出了添加
5、同位素内标氯霉素2d5和采用10%偏磷酸沉淀蜂王浆产品中的蛋白质,上清液经乙酸乙酯提取,用LC2MS/MS测定蜂产品中氯霉素残留量的方法。2实验部分2.1仪器与试剂API4000液相色谱2串联质谱仪,配电喷雾离子源和大气压化学源(美国AB公司);OasisHLBSPE柱(500mg,6cc,Waters公司)。实验用水为二次蒸馏水;甲醇、乙腈、乙酸乙酯、甲苯、正己烷为色谱纯,氯化钠、无水硫酸钠为分析纯。硅胶:105℃灼烧2h,在干燥器内冷却至室温,加1.5%的水脱活,备用。氯霉素标准物质(纯度≥99%,SIMA公
6、司);氯霉素2d5同位素内标:纯度≥99%(德国BGVV研究所)。储备液用甲醇配制,贮存在4℃冰箱中。根据需要用甲醇稀释至适当浓度的标准工作液。2.2液相色谱与质谱条件色谱柱:ZORBAXEclipseXDB2C8,5μm,4.6mm×150mm;流动相:乙腈∶5mmol/L醋酸胺梯度洗脱(见表1);流速:0.4mL/min;进样量:20μL。扫描方式:负离子扫描;检测方式:多反映监测;电喷雾电压:-3500V;雾化气压力:0.266MPa;气帘气压力:0.189MPa;辅助气流速:45L/min;离子源温度:5
7、25℃;去簇电压(DP)-65V。2005201221收稿;2005204207接受本文系国家质量监督检验检疫总局2002年出国人员科技活动资助项目。1768分析化学第33卷2.3样品处理表1流动相梯度洗脱Table1Gradientelutionofmobilephase2.3.1蜂蜜称取5.00g样品,置于50mL离心管中,加入乙腈(%)5mmol/L醋酸胺0.1mL氯霉素2d5(10μg/L),15mL水,8gNaCl,20mL乙酸t/minAcetonitrileNH4AC(%)乙酯,混匀,4000r/m
8、in,离心5min,上层乙酸乙酯过无水硫0208027030酸钠柱至浓缩瓶中,样品溶液再加入20mL乙酸乙酯,重复上67030述操作,合并乙酸乙酯提取液,50℃以下水浴减压浓缩至干。6.18020残渣用10mL乙腈∶甲苯(1∶9)溶液转移入硅胶净化柱6.58020(150mm×5mmi.d.玻璃柱,底部垫约5mm厚脱脂棉,1cm6.62080102080无水硫酸钠,1g硅
