毕赤酵母表达体系中重组蛋白的分离纯化

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1、生物技术通报·综述与专论·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2009年第3期毕赤酵母表达体系中重组蛋白的分离纯化高炳淼长孙东亭罗素兰安婷婷（热带生物资源教育部重点实验室海南大学海洋学院材料与化工学院海南大学生物技术实验中心，海口570228）摘要：随着基因重组技术的快速发展，基因工程产品的利用越来越广泛，但其分离纯化的成本约占总成本的60%~70%。因此，探索一些简单有效的分离纯化方法尤为必要。简单介绍了目前较为流行的毕赤酵母表达体系，着重概述了重组蛋白分离纯化技术方法的应用情况。关键词：毕赤酵母重组蛋白质分离纯化StudyonSeparationandPur

2、ificationofRecombinantProteinsinPichiapastorisExpressionSystemGaoBingmiaoZhangsunDongtingLuoSulanAnTingting（KeyLaboratoryforTropicalBiologicalResources，MinistryofEducationOceanCollegeCollegeofMaterials&ChemicalEngineeringCenterforExperimentalBiotechnology，HainanUniversity，Haikou570228）A

3、bstract：Alongwithfastdevelopmentofthegenerecombinanttechnology，theapplicationofgeneticengineeringproductisgettingwidespread，butthecostoftheseparationandpurificationapproximatelyhavebeenbeinghigh.Soitisessentialtoexploresimpleandeffectiveseparationandpurificationmethodtodecreasethecost.T

4、hisreviewfocusedonprogressofPichiapastorisyeastexpressionsystem，thetechniqueofseparationandpurificationoftherecombinantproteinsrecently.Keywords：PichiapastorisRecombinantproteinSeparationPurification[1]从生物体中有效分离纯化基因重组蛋白质一型酵母（Methy-lotrophicyeast）表达系统。作为第2直是个难题。对于基因重组蛋白纯化技术来说，选代酵母表达系统，它不

5、仅克服了大肠杆菌表达系统择合适的表达系统是相当重要的，因为表达系统决不能表达结构复杂的蛋白质、表达的蛋白不能分泌定了细胞培养过程中产物的性质以及可能产生的到细胞外、背景蛋白多、表达水平低等缺点，并且弥杂蛋白。毕赤酵母是近年来流行的原核和真核蛋白补了哺乳类细胞、昆虫细胞表达系统操作复杂、表质的表达载体。毕赤酵母能使外源真核基因正确翻达水平低、产业化生产造价昂贵的不足，此外，还具[2]译和翻译后加工，并分泌多种蛋白质，使产物易于有其他酵母表达系统无法比拟的优越之处。提纯。纯化重组蛋白质的主要目的是分离出目的蛋巴斯德毕赤酵母表达系统具有强有力的醇氧白，主要的方法有浓缩沉淀、

6、离子交换、亲和层析、化酶基因启动子，可严格调控外源蛋白的表达；同反相层析等。时作为真核表达系统，可对表达的蛋白进行翻译后[3]1酵母表达体系的加工与修饰，从而使表达出的蛋白具有生物活性。巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）是在酿酒酵母另外，毕赤酵母菌营养要求低、生长快、培养基廉表达体系的基础上，用其他的酵母菌株构建的、可价，易于进行操作和培养；其高密度发酵技术业已高效稳定表达外源基因的新表达系统，即甲醇营养成熟，便于工业化生产；表达量高，许多蛋白可达到收稿日期：2008-09-01基金项目：国家自然科学基金（30560184），国家“863”计划（2007A

7、A02Z114），新世纪优秀人才支持计划（NCET-04-0837），海南省重点学科建设项目专项与海南省教育厅高等学校科研项目（Hjkj200719）作者简介：高炳淼（1982-），男，安徽明光人，硕士研究生，研究方向：海洋药物通讯作者：罗素兰，Tel：0898-66289538，E-mail：luosulan2003@163.com34生物技术通报BiotechnologyBulletin2009年第3期每升克级以上水平；表达的外源蛋白可分泌到胞换的离子进行交换，而达到分离目的的方法。该法外，分泌的内源蛋白少，外源蛋白分离纯化简便；外主要依赖电荷间