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《基于密码子优化的蛋白酶k在毕赤酵母中的表达及分离纯化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、微生物学通报Nov.20,2014,41(11):2198−2207MicrobiologyChina©2014byInstituteofMicrobiology,CAStongbao@im.ac.cnDOI:10.13344/j.microbiol.china.140175研究报告基于密码子优化的蛋白酶K在毕赤酵母中的表达及分离纯化孙风敏1韩焱2李文利1*(1.大连理工大学生命科学与技术学院辽宁大连116023)(2.大连市疾病预防控制中心辽宁大连116021)摘要：【目的】提高蛋白酶K在毕赤酵母中的表达产量，建立分离纯化方法。【方法】首先对蛋白酶K密码子进行优化，将其导入毕赤酵母
2、GS115中实现分泌表达。然后对甲醇浓度、发酵温度和pH等表达条件进行优化，再对硫酸铵沉淀、亲和层析等纯化工艺进行比对分析。【结果】蛋白酶K密码子优化后实现了在毕赤酵母中的高效表达。在甲醇量0.75%、温度25°C和pH7.0条件下进行发酵罐培养，蛋白酶K表达量达到2.2g/L。采用Ni-NTA亲和柱对发酵液进行纯化可以得到较好的纯化效果。【结论】密码子优化后的蛋白酶K在毕赤酵母中高效表达并可以利用Ni-NTA亲和柱进行有效分离纯化。关键词：蛋白酶K，密码子优化，表达条件优化，分离纯化Expressionandpurificationofcodonoptimizedproteinas
3、eKinPichiapastorisSUNFeng-Min1HANYan2LIWen-Li1*(1.SchoolofLifeScienceandBiotechnology,DalianUniversityandTechnology,Dalian,Liaoning116023,China)(2.DalianCenterforDiseaseControlandPrevention,Dalian,Liaoning116021,China)Abstract:[Objective]InordertoimprovetheproductionofproteinaseKandsetuppurific
4、ationmethod.[Methods]WefirstoptimizedthecodonsofproteinaseKgeneandtransfereditintoPichiapastoris(GS115)torealizesecretoryexpression.Andcultureconditionsincludingmethanolconcentration,temperatureandpHwereinvestigated.Thepurificationmethods,suchasammoniumsulfateprecipitation,affinitychromatograph
5、y,werefurtheroptimized.[Results]ThroughtheoptimizationofcodonsofproteinaseKgeneandculturalconditions,weobtainedhigh-levelexpressionofproteinaseK.Theresultsshowedoptimalfermentationconditionwassupplementofmethanol0.75%,fermentationtemperature25°CandpH7.0.TheyieldofproteinaseKwas2.2gperliterunder
6、theoptimizedfermentationcondition.TheefficientpurificationwayisNi-NTAaffinitychromatographaftercomparingwiththeothermethods.[Conclusion]TheresultsshowedthatproteinaseKcanbeexpressedathighlevelexpressioninP.pastorisandcanbeefficientpurifiedwithNi-NTAaffinitychromatograph.基金项目：国家自然科学基金项目(No.31201
7、879)*通讯作者：：biolwl@dlut.edu.cn收稿日期：2014-03-04；接受日期：2014-04-29；优先数字出版日期(www.cnki.net)：2014-05-21Keywords:ProteniaseK,Codonoptimization,Fermentationconditionoptimization,Purification蛋白酶K是由林伯氏白色念球菌(TritirachiumalbumLimber)分泌的一种重要的丝氨酸蛋
