TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)

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1、TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品编号产品名称包装C1091TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)20次产品简介：¾碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(ColorimetricTUNELApoptosisAssayKit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。¾细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DN

2、Aladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TerminalDeoxynucleotidylTransferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin(Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是本试剂盒通过TUNEL(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)法检测细胞凋亡的原理。

3、¾本试剂盒有如下优点。(1)高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。(2)特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3)快速：仅需约2-3个小时即可完成。(4)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。¾TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非

4、凋亡细胞判断为凋亡细胞。¾极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。¾本试剂盒足够检测20个样品。包装清单：产品编号产品名称包装C1091-1TdT酶40µlC1091-2Biotin-dUTP960µlC1091-3TdT酶稀释液(选用)500µlC1091-4Streptavidin-HRP22µlC1091-5Streptavidin-HRP稀释液1mlC1091-6DAB显色液A6mlC1091-7DAB显色液B

5、6mlC1091-8标记反应终止液6ml—说明书1份保存条件：-20℃保存。DAB显色液A和DAB显色液B需避光保存。注意事项：¾需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)等适当的封片液，用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.1%TritonX-100的PBS或向碧云天订购免疫染色洗涤液(P0106)。需自备过氧化氢，除石蜡切片外需自备甲醇。¾如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。¾为了您的安全和健康，请穿实验服并戴

6、一次性手套操作。使用说明：1.对于贴壁细胞或细胞涂片：a.用PBS或HBSS洗涤1次。b.如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。d.用PBS或HBSS洗涤1次。e.加入含0.1％TritonX-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。f.用PBS或HBSS洗涤1次。g.在用甲醇配制的0.3%过氧化氢溶液(0.3%H2O2inMethanol)中室温孵育20分钟，以灭活切片内源的过氧化物酶。随后用PBS或HBSS洗涤3次。

7、h.转步骤5。2.对于悬浮细胞或细胞悬液：a.收集细胞(不超过200万细胞)，用PBS或HBSS洗涤1次。b.涂片，使细胞粘附在载玻片上。可以干燥样品使细胞贴得更牢，或使用适当的粘附试剂。c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。d.用PBS或HBSS洗涤1次。e.用含0.1％TritonX-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106)，冰浴孵育2分钟。f.用PBS或HBSS洗涤1次。g.在用甲醇配制的0.3%过氧化氢溶液(0.3%H2O2inMethanol)中室温孵育20分钟，以灭活切片

8、内源的过氧化物酶。随后用PBS或HBSS洗涤3次。h.转步骤5。3.对于石蜡切片：a.二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。