碧波tunel细胞凋亡原位检测试剂盒(荧光及显色法)(细胞样本专用)1

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1、5碧波TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（荧光及显色法）（细胞样本专用）CatNumber：BA2650Specification：50次Storeat:-20℃foroneyearMADEBYBIOBOX碧波TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（荧光及显色法）（细胞样本专用）一、产品简介TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（荧光及显色法）(FluorescenceandColorimetricTUNELApoptosisAssayKit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于经过固定和洗涤的细胞或组织，只要经过一步染色反应把荧光素连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3’-OH

2、末端，洗涤后就可以通过荧光显微镜检测到凋亡细胞；荧光素亦可被抗荧光素抗体(anti-fluoresceinantibody)标记，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈棕色），因而在普通光学显微镜下即可观察和计数凋亡细胞。细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNAladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TerminalDeoxynucleotidylTransferase,TdT)的催化下加上荧光素(F

3、ITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜检测；同时荧光素亦可被抗荧光素抗体(anti-fluoresceinantibody)标记，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈棕色），因而在普通光学显微镜下即可观察和计数凋亡细胞。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被标记。这就是TUNEL(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)法检测细胞凋亡的原理。本试剂盒适用于细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。本试剂盒有如下优点：1、高灵敏度：可以在单

4、细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。2、特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。3、快速：仅需约3小时即可完成。4、操作简单：使用Ready-to-Use型试剂，并配有DAB。5、方便观察：可使用荧光显微镜观察实验结果，亦可在信号转换后使用光学显微镜观察实验结果。二、试剂盒组份组份Cat:BA2620Cat:BA2650Cat:BA26100储存条件平衡液1.0mL2.5mL5.0mL-20℃荧光标记液20μL50μL100μL-20℃避光TdT酶80μL200μL400μL-20℃anti-fluore

5、sceinantibody10μL25μL50μL-20℃避光DAB2mg5mg10mg-20℃避光三、试剂盒以外自备仪器和试剂多聚甲醛、甲醇、乙醇、PBS、H2O2、TritonX-100、柠檬酸钠、复染染液：苏木素或甲基绿等；盖玻片、载玻片、染色缸、染色湿盒、荧光显微镜、光学显微镜、37℃孵箱、移液器等。四、保存条件：-20℃保存，荧光标记液和DAB需避光保存。五、注意事项：51、TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡

6、细胞判断为凋亡细胞。2、极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。3、使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。4、因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心。5、为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。6、TdT酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。7、DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10mg/ml）后，按说明书显色使用。8、为了您的安

7、全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。六、操作规程A、检测样本的预处理TUNEL检测时样本的预处理是试验的关键所在，本说明书推荐的条件仅为普遍情况，用户需根椐自已的样本材料及首次试验结果来调整各个条件，如处理时间、处理浓度等，来优化出适合自身样本的试验条件，从而做出客观的试验结果。1、对于细胞样本a、把准备好的细胞涂片或爬片自然晾干。b、把晾干的样本浸入固定液，室温（15-25℃）固定15-60min。（固定液的配制：4%多聚甲醛溶于PH7.4的PBS中，需新鲜配制）c、把固定