凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒

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1、凯基TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（通用）（BIOTIN标记POD法,适用于细胞.组织样本）使用说明书一、TUNEL制品说明凯基TUXEL细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程屮细胞核DNA的断裂情况，其原理是牛物素（biotin）标记的dUTP在脱氣核糖核甘酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂的DNA的3-011末端,并可与连接了的辣根过氧化酶的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）特异结合，在辣根过氧化酶底物二氨基联苯胺（DAB）的存在下，产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的

2、细胞，因而在普通显微镜下即可观察和计数凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-0H形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。本试剂盒特点•操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有ProteinaseK和DAB。•高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。•高特异性：能特异性染色凋亡细胞。•快速操作：整休操作约需3小时。•用途广泛：可应用于组织切片、细胞样本等。•方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。•高正确性：冇阳性对照片的制备方法，可以

3、确认试剂盒的冇效性使用注意事项1.使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。2.因木试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。3.为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。4.TdT反应液最好在使用前根据样木数量集屮配制，再分别滴加于各样木片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。5.为防止样本脱落，请使用硅烷(Silane)处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。6.固定好的样木可以在-20°C的70%乙醇屮放置30分钟或至过夜，以改善细胞的渗透性。7.使用PBS清洗细胞样本吋，不耍直接加在细胞样本上，以防止细胞样

4、本的脱落。8.进行PBS淸洗时，以5分钟清洗3次为标准。9.DAB为固体粉末,使用前加入PBS配制成20XDAB(10mg/ml)后，按说明书显色使用。二、TUNEL试剂盒组分组份Cat:KGA702Cat:KGA703Cat:KGA704储存条件20assays50assays100assaysEquilibrationBuffer1.0mL2.5mL5.0mL-20°CBiotin-ll-dUTP20uL50uL100uL-20°CTdTEnzymo80uL200nL400uL-20°C50XProteinaseK40uL100uL200u

5、L-20°CStreptcividin-I1RPIOpL25uL50uL4°C避光DAB2mg5mg10mg-20°C试剂盒以外自备仪器和试剂光学显微镜、37°C孵箱、微量移液器、染色湿盒、盖玻片、载玻片、染色缸。二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2、TritonX-100.柠檬酸钠、复染染液：苏木素或甲基绿等。三、操作流程概览四、检测样本的预处理TUNEL检测时样木的预处理是试验的关键所在，木说明书推荐的条件仅为普遍情况，用户需根据口已的样木材料及首次试验结果來调整各个条件（参照Page9},如处理时间、处理浓度等，来优化出适合自身样本的试验条

6、件，从而做出客观的试验结果。1.细胞样本的准备操作注意事项:1.为防止样木脱落，请使用硅烷（Silano）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。2.使用PBS清洗细胞样本时，不耍直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。3.进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。4.固定液、PBS、封闭液、通透液、染色缸需用户自备，请按上述方法配制。五、标记和显色反应预处理好的样本PBS潦洗两次，样本周围用魔水纸吸干每个样本滴加504LTdT81反应板，加盖股片37C琏光湿润反应dOniiii(TdTIHJfcSffts45U-LEquilibrationBuf

7、fer+1I^LBiotinnll-dUTP-MHLTcTTEnzyae.需新鲜配齢(阴性对照片不加TdTSt)PBS样本周餌吸水勰干滴加5OPLStreptavidinnHRPZEfRft.加盖玻片37C跟润睡光反应30min.(Strep-tavidiii-HRP工作板=0.5U-LStreptavidinrHET-l-SS・5ULPBS)操作注意事项：1.进行PBS清洗时，以5分钟清洗3次为标准。2.PBS清洗后，为了各种反应的冇效进行，请尽量除去PBS溶液后再进行下一步反应3.在载玻片上的样木上加上实验用反应液后，请盖上盖玻片或保鲜膜，

8、或在湿盒中进行，这样可以使反应液均匀分布于样本整体，又可以防止反应液干燥造成实验失败。4.TdT酶反应液即用即配，短暂于冰上保存。不宜长期保存，长期保