小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的培养

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1、小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)的培养主要目次【经典的BMDC制备方法简图】---------------------------------------------1【BMDC培养的发展简史】---------------------------------------------------2【经典的BMDC培养法】-Inaba法(改良)----------------------------------4【BMDC大量制备法】-Son法----------------------------------------------

2、---6【BMDC大量制备法】-Lutz法------------------------------------------------7【注意事项】----------------------------------------------------------------------9摘自文献InabaK,etal.JExp.Med.1992;176(6):1693-702[3]详情请致电授权经销商——杭州联科生物技术股份有限公司中国杭州拱墅区祥园路108号智慧信息产业园三期3号楼13层全国免费客服电话：400-6721-60

3、0邮箱：service@liankebio.com【经典的BMDC制备方法简图】诱导分化再铺板完全成熟BoneMarrowImmatureDCMatureDC第2d和第4d3/4量换液，并补加足量GM‐CSF和IL‐40d2d4d6d8d10d获得成熟的BMDC1.小鼠断颈处死，取股骨和胫收集DC，重新铺板，加入以下任意一种成熟诱骨；以促进DC更成熟导剂：2.分离骨髓并溶血；1.rmTNF‐(25‐50ng/ml)3.加入rmGM‐CSF(25ng/ml)2.LPS(1g/ml)和rmIL‐4(10ng)培养。3.rmCD40L(

4、1g/ml)【前言】C是“DendriticCells”的缩写，中文全称为“树突状细胞”，因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。DC是由2011年诺贝尔奖获得者、加拿大D籍科学家RalphM.Steinman于1973年发现的[1]，是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞(AntigenPresentingCells,APC)。已证实，DC是唯一能够显著刺激初始T细胞(NaïveTcells)增殖的APC，而其它种类的APC(如单核巨噬细胞，B细胞等)仅能刺激已活化的或记忆性的T细胞，因此DC是机体适应性T细胞免疫应答的始动者，在

5、肿瘤免疫中也发挥着极其重要的作用。虽然DC存在于体内多种组织中，但含量很少，无法满足科学研究和临床治疗的需要，所以人们尝试多种方法来体外培养和扩增DC。对于人，最常用的方法是从人外周血单个核细胞(PBMC)诱导DC的产生。而对于小鼠，最常见的方法是从骨髓细胞诱导产生DC，即骨髓来源的DC(BoneMarrow-DerivedDendriticCells，BMDC)。鉴于功能分析和分子生物学研究的需要，获得更高数量和更高纯度的BMDC是大家一直追求的目标，本文将与大家分享BMDC的经典制备方法和大量制备法，大家可根据自身1详情请致电授权

6、经销商——杭州联科生物技术股份有限公司中国杭州拱墅区祥园路108号智慧信息产业园三期3号楼13层全国免费客服电话：400-6721-600邮箱：service@liankebio.com需要选择使用。另外，我们还备有实用的BMDC培养操作视频(内部交流，非商用)，因文件比较大，若需要，可通过我们的企业QQ(号码为：800053055)向我们索取发送。【BMDC培养的发展简史】1973年---加拿大籍科学家RaplphM.Steinman在美国洛克菲勒大学(RockefellerUniversity)工作时从小鼠外周淋巴器官(脾、淋巴结

7、和派氏集合淋巴结)中首次鉴定出树突状细胞(DendriticCells,DC)[1]。Steinman也因此获得了2011年诺贝尔生理学或医学奖。1992年---日本京都大学(KyotoUniversity)的Inaba在添加GM-CSF(粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子)的情况下，分别成功从小鼠血液和骨髓细胞体外诱导出大量的DC[2,3]。因此，Inaba被认为是小鼠DC体外培养的创立者，且Inaba法被称为小鼠BMDC培养的经典方法。1.这些工作均是在RalphM.Steinman的参与下完成的；2.Inaba培养的BMDC来源于小鼠

8、股骨和胫骨中的骨髓；3.Inaba先用抗体+补体法去除骨髓中的淋巴细胞，以防淋巴细胞对BMDC培养的影响；4.在诱导分化过程中，为防止粒细胞的干扰，Inaba通过每2天轻摇培养板并3/4体积换液的方法来尽量去除粒细胞；5