壳聚糖修饰对阳离子脂质体生物学性能的影响

《壳聚糖修饰对阳离子脂质体生物学性能的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、非病毒基因载体的生物学性能研究摘要利用本课题组合成的阳离子类脂，加入不同助剂制备阳离子脂质体。分析其与质粒的结合能力以及复合物形态。进行细胞的体外转染，研究转染效率和细胞毒性。采用薄层分散和超声法制备阳离子脂质体。琼脂糖凝胶电泳分析阳离子脂质体与质粒pGFP-N2(报告基因)DNA的结合能力，原子力显微镜检测复合物的形态。以商品试剂Lipofectamine2000为对照，利用脂质体／DNA复合物转染MCF．7细胞和HeLa细胞，荧光显微镜观察其基因转染效率。进行了转染条件优化，利用MTT法评价转染试剂的毒性。原子力显微镜分析

2、表明，脂质体／DNA复合物颗粒的表面不光滑，有一定的黏连性，能较规律的分散在云母片上。而壳聚糖修饰脂质体／DNA复合物颗粒的表面相对光滑。加入少量或等量DOPE，延滞DNA能力增强，DOPE量多时反而减弱；加入蔗糖酯延滞能力变化不明显；壳聚糖修饰的脂质体，延滞DNA的能力明显增强。加入蔗糖酯后，转染效率下降；添7bHDOPE后，转染效率升高；壳聚糖修饰的脂质体转染效率明显提高。壳聚糖修饰脂质体最佳转染条件为：壳聚糖与质粒比例为8：1、复合物形成时间45min、细胞汇合度80％。在此条件下，对HeLa细胞的转染效率达到70％以上

3、，且细胞毒性较低。在血清存在的情况下，对MCF一7细胞转染效率影响不大。壳聚糖修饰脂质体作为基因载体具有很好的应用前景。关键词：阳离子脂质体，转染效率，DOPE，蔗糖酯，壳聚糖非病毒基因载体的生物学性能研究AbstractCationiclipidssynthesizedbyourgroupwerepreparedintoliposomes、析thdifferentadditives．TheabilityofcomplexingofliposomesandpDNAwereanalyzed．Ttransfectioneffici

4、encyinvitroandcationiclipid-associatedcytotoxicitywerediscussed．Cationicliposomeswerepreparedbythin—filmultrasonictechnique．ThecondensationofplasmidDNA(pGFP-N2)WasstudiedthroughagarosegelelectrophoresisandthemorphologyWasanalyzedbyatomicforcemicroscope(AFM)．Thetrans

5、fectionefficiencyoflipoplexofMCF-7andHeLacellswasobtainedbasedongreenfluorescentprotein(GFP)expressionbyinvertedfluorescentmicroscopyusinglipofectamine2000ascontrast．TransfectionconditionswereoptimizedandthecelltoxicityWasevaluatedusingMTTassay．Thesurfaceoflipoplexp

6、articleswasnotsmoothandsomewhatadhesivelyobservedbyAFM．Lipoplexcanbespreadonmicaregularly．Whilethesurfaceofchitosanmodifiedliposome／DNAcomplexwassmooth．TheeomplexingabilityWasenhancedbyaddinglittleorequimolarDOPE，butdescend．Thecomplexingabilityisnochangebyaddingsucr

7、oseesterandincreasedobsviouslyafteraddingchitosan．chitosan．TransfectionefficiencyWasdecreasedafteraddingsucroseester,increasedafteraddingDOPEandCanincreasedobsviouslyafteraddingchitosan．Theoptimumtransfectionconditionofchitosan—modifiedliposomeWaSasfollows：theratioo

8、fchitosantopDNAWas8：1；thetimeofcomplexformationWas45min；thedegreeofcellconfluenceWas80％．，nletransfectionefficiencyofHelacellsinvitroWasabo