瑟氏泰勒虫感染牛外周血单个核细胞酵母双杂交cDNA文库构建及鉴定

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1、畜牧与兽医2015年第47卷第9期·65·氈欀欀欀欀欀氈欀欀欀欀兽医欀瑟氏泰勒虫感染的牛外周血单个核细胞酵母欀欀欀科技欀双杂交cDNA文库构建及鉴定欀氈欀欀欀欀欀氈*董亮，张守发，许应天，于龙政，李积旭，贾立军，薛书江(延边大学农学院动物医学系，吉林延吉133002)摘要:为了研究牛瑟氏泰勒虫与牛外周血单个核细胞之间蛋白的相互作用，以自然感染瑟氏泰勒虫的牛外周血单个核细胞为材料，纯化并提取总ＲNA，应用SMAＲT技术合成双链cDNA(dscDNA)。利用纯化柱纯化dscDNA，并与线性化的pGADT7－Ｒec共转化酵母菌Y187，以同

2、源重组8的方式在酵母细胞内构建牛外周血单个细胞的酵母双杂交cDNA表达文库。结果显示，文库容量为4.0×10CFU/mL，随机挑取单克隆进行菌落PCＲ检测，插入的双链cDNA片段大小集中在0.4～2.0kb，文库重组率为95%。表明此文库达到要求，可用于酵母双杂交筛选。关键词:瑟氏泰勒虫;外周血单个核细胞;酵母双杂交;cDNA文库中图分类号:S855.9+1文献标志码:B文章编号:0529－5130(2015)09－0065－04牛瑟氏泰勒虫病是由经蜱传播的泰勒科、泰勒属康发展的重要疾病之一。［4］的瑟氏泰勒虫(Theileriase

3、rgenti)寄生于牛体内引起酵母双杂交技术是由Fields等在1989年首次的一种血液原虫病，其主要临床症状为高热、消瘦、提出并初步建立的。由于具有高效性、方便性、快捷［1－2］贫血、出血和体表淋巴结肿大。据调查，该病在性和可在细胞内进行，在诞生二十多年来已经成为研外地引进的牛和改良牛发病率可达45.2%～95%，究蛋白质－蛋白质相互作用的重要手段。如今，这一［3］在无任何治疗的情况下其死亡率可达到90%。随技术被越来越多的实验室所采用，自1999年到2011着养牛业的迅速发展和经济贸易的全球化，各国之间年每年使用到酵母双杂交技术发

4、表的文献都在500篇［5］品种牛以及牛类产品的交流日趋频繁，牛瑟氏泰勒虫以上，总共被引用26万余次。目前，国内外在牛病的流行区域正日益扩大，已成为严重威胁养牛业健瑟氏泰勒虫病的病原学和诊断技术等方面的研究虽然取得了一定进展，但关于牛瑟氏泰勒虫宿主互作蛋白收稿日期:2015－04－15［6－8］方面的研究还未见有报道。基金项目:国家自然基金项目(31460657);吉林省现代农业产在酵母双杂交技术平台中，所构建的酵母双杂交业技术体系建设专项资金资助(201327);延边大学博士启动基金cDNA文库的内容和质量往往是整个研究的关键。外项目

5、周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells，作者简介:董亮(1990－)，男，硕士生，主要从事分子免疫学研究，E－mail:1157396419@qq.comPBMCs)的主要构成有单核细胞、T淋巴细胞和树突*通信作者:薛书江，讲师，主要从事寄生虫蛋白组学和免疫学细胞等。外周血单个核细胞的作用广泛，可以增强免研究，E－mail:sjxue@ybu.edu.cn疫力，清除病原体，还是固有免疫和获得性免疫的重櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔

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