玉米叶片酵母双杂交cdna文库的构建及评价

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1、维普资讯http://www.cqvip.com蕃北磨盐学报2008，17(5)：162-165ActaAgriculturaeBoreali-occidentalisSinica玉米叶片酵母双杂交cDNA文库的构建及评价张军杰，崔红军，黄玉碧(1．四川农业大学理学院，四川雅安625014；2．NJq农业大学玉米研究所，四川雅安625014)摘要：以玉米骨干自交系478为试验材料，从各生长时期的叶片中提取总RNA后，再利用磁珠法从中分离纯化出mRNA，然后以mRNA为模板，反转录合成cDNA第一链，再在DNA聚合酶作用下，通过长距离PCR，扩增双链cDNA(dscD

2、NA)。利用SMART技术，通过同源重组的方法，在酵母菌株AH109中构建了玉米叶片全长cDNA文库。经检测，文库的转化率为1．54×10转化子／3gpGADT7一Rec，文库滴度为1．03×10pfu／mL，重组率为95。关键词：玉米叶片；酵母双杂交文库；构建中圈分类号：Q786文献标识码：A文章编号：1004—1389(2008)05—0162—04ConstructionandAppreciationofYeastTwoHybridcDNALibraryofMaizeLeafZHANGJun—jie，CUIHong—jun。andHUANGYu-bi(1_Co

3、llegeofLifeScience，SichuanAgriculturalUniversity，YaanSichuan，625014，China；2．MaizeResearchInstitute，SichuanAgriculturalUniversity，YaanSichuan625014，China)Abstract：Themaizeinbredline478wasusedexperimentmateria1，andthetotalRNAwasisolatedfromeachperiodsofgrowthmaizeleafandmRNAwasseparateda

4、ndpurifiedusingtheSA—PMPsmethod．Afterwords，mRNAwasusedascyclostyleandsynthesizedtheprimacyeDNA．UnderDNApolymerasefunction，DNAwasexpanddoublestrandDNAbyusingLD-PCRapproach．UsingSMARTtechniqueandhomologousreorganizationmethod，theyeasttWOhybridcDNAlibrarywasconstructedinyeastAH109，Afterex

5、amination。the1ibraryconversionratewas1．54×10transfersbeggar／3gpGADT7一Rec，thecapacityofthelibrarywas1．03×10。pfu／mL，andthereorganizationratewas95．Keywords：Maize1eaf；YeasttWOhybridcDNAlibrary；Construction玉米是主要的粮食、饲料作物和工业原料，利产量及改善品质提供理论依据[2]。但目前关于玉用酵母双杂交技术建立玉米叶片的全长cDNA米叶片酵母双杂交全长cDNA文库的构建还未

6、文库对于研究玉米叶片蛋白质与蛋白质、蛋白质见报道，因此本试验通过利用SMART技术和同与RNA、蛋白质与小分子等的相互作用有着重要源重组的方法，在酵母菌株AH109中构建了玉的意义口]。同时，玉米叶片酵母双杂交cDNA文米叶片全长cDNA文库，以叶片mRNA为模板，库的构建对于玉米叶片基因的克隆和功能鉴定具反转录合成cDNA第一链，在DNA聚合酶作用有十分重要的意义，有利于开展对玉米叶片光合下，通过长距离PCR，扩增双链cDNA，纯化的双作用及其他生理机能的研究，从而为提高玉米的链cDNA与线性化pGADT7一Rec质粒载体共同收稿日期：2008—03—03修回曰期

7、：2008—04—13基金项目：国家863计划(SQ2007AA10Z135024)；四川省教育厅青年基金项目(2006B010)资助。作者简介：张军杰(1974一)，男，山西临汾人，讲师，博士，从事玉米淀粉品质研究。E-mail：malzestarchs@163．eom。*通讯作者：黄玉碧。E—mail：yubihuang@sina．com维普资讯http://www.cqvip.com5期张军杰等：玉米叶片酵母双杂交cDNA文库的构建及评价转化酵母菌株感受态AH109，经胞内同源重组形肚L20倍的SSC溶液(柠檬酸钠和NaC1混合溶成环状文库质粒，应用营养缺