牛外周血单个核细胞酵母双杂交cdna文库的构建和鉴定

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3、ｃ／／？Ｈ勺游ｖｉ１ｉ＾学校代码：１０化４ｒｎ■膠分类号；兽医硕±学位论文牛外周血单个核细胞醇母双杂交ｃＤＮＡ文库的构建和鉴定ＣＡＴＴＬＥＰＥＲＩＰＨＥＲＡＬＢＬＯＯＤＭＯＮＯＮＵＣＬＥＡＲＣＥＬＬＳＹＥＡＳＴＤＯＵＢＬＥＣＲＯＳＳｃＤＮＡＬＩＢＲＡＲＹ抓ＩＬＤＡＮＤＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮ张闯兽医硕±延边大学分类号密级………＇…＇………■ＵＤＣ？？２０学号１３０５０３００延边大学硕±学位论文牛外周血

4、单个核细胞酵母双杂交ｃＤＮＡ文库的构建和鉴定研究生姓名张闯培养单位延边大学农学院指导教师姓名？职称鲁老色玲学科专业兽医硕去研究方向动紙传染病论文提交日期２０１５年记曰本推文百达到兽医硕ｌｉ：学位论文奠求，■献减：：底＊，概＇＇Ｉ朱旅戀．答辩委员会主席＇■答辩委员会委员印答鑑委员会委员＾《卷（印、一答辩委员会委员＿＿＿＿＿＿＿（印）．答辩委员会委员＿＿＿＿（印）延边大学於年＾月日Ｉ延边大学硕±学位论文学位论文独创性声明郑重声明

5、；本人所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成Ｉ果。就我所知，，论文中除了特别加Ｗ标记和致谢的部分外不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，化不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的材料一。与我同王作的同事对本研究所做的任何贡献均臣在论文中作了明确的说巧并表示谢意。一切责任和后果如违反上述声明，本人愿意承担由此引发的。￣；■口研究生签名；袭日期。年／Ｂ＾１备＾月Ｉ学位论文使用授权声明本人在导师指导下所完成的学位论文，，学校有权保存其电子和纸制文档可Ｗ借阅或上网公布本学位论文的全

6、部或部分内容，．可向有关部口或机构送交并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按■保密的有关规定和程序处理。本学位论文属于：１．保密口３密后适用于本；２．不保密囚。，隻明＿＿＾＜＾＾研究生签名：导师签名：夕爭日巧；得知产延边大学硕±学位论文摘要Ｂ一布氏杆菌病（ｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ）是种人畜共患传染病。１９世纪末期被人们发现并’广泛研巧０。，迄今为止己经有１０多年的历丈布氏杆菌病是我国规定的乙类动物一疫病，也是目前严重威胁养牛业发展和人类僮康的重要疾病之。酵母双杂交

7、系统是用来研究蛋白质与蛋白质、蛋白质与小分子之间相互作用的实验技术。是通过建立牛外周血单个核细胞的ｃＤＮＡ文库，来筛选与牛布氏杆菌结合的受体蛋白，对布氏杆茵病的预防和控制有重要的意义。本研究预先制备牛外周血单个核细胞，采用Ｔｒｉｚｏｌ法提取牛外周血单个核细胞的总ＲＮＡ。利用美国Ｃｌｏｎｔｅｄｉ公司的ＳＭＡＲＴ技术构建牛外周血单个核细胞的酵母双杂交ｃＤＮＡ文库。．ｃＤＮＡ的前端将全部的ＤＮＡ合成，然后在整个反应中加入ＳＭＡＲＴ曲Ｏｌｉｇｏ，目的是让ｃＤＮＡ的前端与ｍＲＮＡ形成互补，合成双链ＮＡ的－ＰＣＲ－ｃＤ

8、方法是通过长距离ＰＣＲ（ＬＤ。因为双链ｃＤＮＡ与ＰＧＡＤＴ７Ｒｅｃ利）用酵母细胞内具有非常相似的重组酶活性，进而形成具有复制活性的文库质粒，那么在ＳＤＡＬｅｕ培养板上筛选出所有克隆。所