应用实时荧光RT-PCR检测柑橘黄化脉明病毒

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1、园艺学报，2016，43(1)：168–174.ActaHorticulturaeSinica168doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0774；http：//www.ahs.ac.cn应用实时荧光RT-PCR检测柑橘黄化脉明病毒111121,*陈洪明，周彦，王雪峰，周常勇，杨秀燕，李中安12（西南大学/中国农业科学院柑桔研究所，国家柑桔工程技术研究中心，重庆400712；安岳县柠檬科学技术研究所，四川安岳642300）摘要：为更快速准确检测柑橘黄化脉明病毒（Citrusyellowveinclea

2、ringvirus，CYVCV），根据病毒外壳蛋白基因的保守序列设计特异性引物，通过体系优化得到最佳反应条件，建立基于SYBRGreenⅠ的CYVCV实时荧光RT-PCR检测方法。该方法可特异性检测CYVCV，而测试的柑橘衰退病毒、碎叶病毒等5种柑橘病毒均不能检测出。灵敏度较普通RT-PCR提高了100倍，标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系，扩增效率和相关性系数分别为102%和0.999。对田间样品的检测结果表明，建立的实时荧光RT-PCR适用于检测不同柑橘品种中CYVCV的含量。关键词：柑橘；柑橘黄化脉明病毒；实时荧光RT

3、-PCR；检测；应用中图分类号：S666文献标志码：A文章编号：0513-353X（2016）01-0168-07DetectionofCitrusyellowveinclearingvirusBasedonaReal-timeRT-PCRApproach11112CHENHong-ming，ZHOUYan，WANGXue-feng，ZHOUChang-yong，YANGXiu-yan，andLI1,*Zhong-an1（CitrusResearchInstitute，SouthwestUniversity，ChineseAcade

4、myofAgriculturalSciences，NationalCitrusEngineering2ResearchCenter，Chongqing400712，China；LemonScienceandTechnologyInstitute，Anyue，Sichuan642300，China）Abstract：Todeveloparapidandreliabledetectionmethod，areal-timeRT-PCRsystembasedonSYBRGreenⅠwasestablishedbyusingapairofsp

5、ecificprimersdesignedfromconservedcoatproteingeneofCitrusyellowveinclearingvirus（CYVCV）.Thesensitivity，specificityandapplicabilityofthesystemwereevaluatedaccordingly.TheresultsshowedthatampliconswereproducedfromCYVCVisolates，whereasnoampliconsfromnon-CYVCVcitrusvirussa

6、mplesincludingCitrustristezavirus（CTV）andCitrustatterleafvirus（CTLV）wereobtained.Thesensitivityofthereal-timeRT-PCRwas2100-foldhigherthanthatofconventionalRT-PCR.Anexcellentlinearcorrelation（R=0.999）obtainedfromtwostandardcurvesofcRNAandtheamplificationefficiencywas102

7、%.Thedatafromfieldcitrussamplesdetectionshowedthatthereal-timeRT-PCRsystemcouldbeusedtodeterminetheconcentrationofCYVCVinthedifferentcitrusspecies.Keywords：citrus；Citrusyellowveinclearingvirus；real-timeRT-PCR；detection；application收稿日期：2015–10–12；修回日期：2016–01–21基金项目：中央高

8、校基本科研业务费专项（XDJK2015C091，2015A009，2014A001）；重庆市两江学者项目；国家科技支撑项目（2012BAD19B06）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：zhonga