PinX1在端粒酶端粒调控中的作用分析

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1、福建农林大学硕上毕业论文中文摘要端粒的生物学功能主要是保护染色体木端，避免核酸酶对染色体术端的降解，防止染色体之间发生融合和重排，在维持基因组结构的完整性和稳定上起重要作用。端粒酶由端粒酶逆转录酶(TERT)和端粒酶RNA(TRC)模板组成的具有特殊逆转录活性的核糖核蛋白复合物。PinXl是近年在入和酵母细胞中发现的一个能与端粒／端粒酶相互作用的保守核仁蛋白。本研究的目的：进一步阐明PinXl在端粒酶／端粒调控中的作用和机制，以及其对端粒酶阳性肿瘤细胞的影响。方法：根据PinXlmRNA序列设计PinXlshRNA，转入HTl080、HepG2和U20S肿瘤细胞中进

2、行稳定表达，以沉默它们内源PinXl的表达：然后分别检测这些shRNAPinXl的稳定肿瘤细胞系的细胞生长率和细胞衰老、DNA损伤诱导凋亡敏感性及端粒酶活性和端粒长度，接着进行Myc—POTl免疫共沉淀(IP)。结果：PinXl在人类肿瘤细胞系中遍在表达，沉默PinXl导致端粒酶阳性肿瘤细胞衰老，提高端粒酶阳性肿瘤细胞对DNA损伤诱导凋亡的敏感性，引起端粒酶阳性肿瘤细胞端粒缩短和功能紊乱，减少端粒酶与POTl端粒蛋白组分内源性结合。结论：本研究揭示了PinXl在端粒酶／端粒调控中也存在正调控作用；组成型表达PinXl有助子端粒酶介导的端粒维持和促进癌细胞的生长。关键

3、词：肿瘤，端粒，端粒酶，PinXl，基因沉默福建农林大学硕士毕业论文AbstractThemainbiologicalfunctionoftelomereisprotectingtheendofchromosomefromend—to-endfusion，recombinationanddegradation。ThetelomeraseRNPisminimallycomposedoftwoessentialelementscalledtheproteintelomerasereversetranscriptase(TERT)andthesinglestrandedR

4、NA(TR)。PinXlisanevolutionallyconservednucleolarproteinthathasbeenrecentlydemonstratedasatelomerase／telomereinteractingfactorinboththehumansandtheyeasts．Purposes：tofurthercharacterizetherolesofPinXlintelomerasehelomerere91．tlationsinhumancancersand‘theinfluencesofPinX1ontelomerase—posit

5、ivecancerceils．Methods：accordingtoPinXlmRNAsequence，PinXlshRNAwasdesigned，andinfectedintoHTl080，HepG2andU20Scancercelllinesforstableexpressing；ThentheinfluenceofsilencingPinX1oncellproliferationandsenescence，DNA-damageinducedapoptosis，telomeraseactivityandtelomerelengthweredetectedinth

6、esestableceils；Finally，Myc—POTlimmunoprecipitation(IP)assaywerecarriedout．ResUIts：PinX1wasexpressedubiquitouslyinvarioushumancelllines．SilencingPinXlintelomerase—positivecancercellsCOUldresl-tItincellsenescence，improvesensitivityofDNA-damageinducedapoptosis，arosetelomereshorteningandit

7、、Sdysfunction，reducetheassociationbetweentelomeraseandPOTl-containingtelomericcomponents．Conclusion：inthisstudy，anovelpositiveroleofPinX1intelomerase／telomereregglationswasrevealed，andtheconstitutiveexpressionofPinX1attributestothetelomerase-mediatedtelomeremaintenanceandproliferatio