盘锦红海滩细菌多样性及1株产碱性蛋白酶菌株的研究

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1、单位代码：１０１６６画一硕士学位论文盘锦红海滩细菌多样性及１株产碱性蛋白酶菌株的研究论文作者：＾５微生物学学科专业：指导教师：＾培养单位：生命科学学院全曰制培养类别：完成时２０１８年５月２１曰间：沈阳师范大学学位评定委员会全日制研究生编号：类教育硕士别同等学力硕士学位论文题目：盘锦红海滩细菌多样性及1株产碱蛋白酶菌株的研究培养单位：生命科学学院专业名称：微生物学指导教师：卜宁教授研究生：袁野完成时间：2018年3月沈阳师范大学研究生处制学位论文独创性声明本人所呈交的学

2、位论文是在导师的指导下取得的研宄成果。据我所知，除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人己经发表或撰写过的研宄成果对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确说明并表示了谢意。作者签名：日期：学位论文使用授权声明本人授权沈阳师范大学研究生处，将本人硕士学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索；有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，允许论文被查阅和借阅；有权可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后适用本规定。

3、作者签名又日期：邊？叫盘锦红海滩细菌多样性及1株产碱蛋白酶菌株的研究摘要盘锦红海滩是具独特魅力的湿地资源，独特的生态环境特征使其成为特殊微生物生存的大本营，是筛选功能性菌株的天然宝地。研究盘锦红海滩微生物多样性并对其进行分离鉴定和功能分析，对于发现微生物新种属，了解该土壤环境微生物资源、进化，探索微生物与环境间互作机制具有重要意义。本研究利用高通量测序技术分析盘锦红海滩细菌多样性，分离嗜盐、嗜碱细菌，筛选高产碱性蛋白酶菌株，探究其酶学特性。主要研究结果如下：1.利用高通量测序技术对5个采样点的盘锦红海滩15个土壤样品进行测序，结果表明

4、盘锦红海滩的细菌群落分属于9个门，其中变形菌门（proteobacteria）和拟杆菌门（Bacteroidets）为优势菌，分别占45.24%和21.90%；而其他7个门占比为32.86%，分别为厚壁菌门（Firmicutes）8.75%，绿弯菌门（Chloroflexi）6.92%，放线菌门（Actinobacteria）4.32%，芽单胞菌门（gemmationadetes）3.09%，酸杆菌门（Acidobacteria）2.48%，浮霉菌门（planctomycetes）1.63%，绿菌门（ignavibacteria）1.05%

5、，其他菌门4.62%。2.利用稀释涂布和划线法分离得到80株嗜盐、嗜碱细菌，研究盘锦红海滩可培养微生物的种群构成，结果表明可培养的80株细菌分属于7门10属，其中芽孢杆菌属为优势菌属，占66.25%。3.从可培养的80株细菌中进一步筛选得到1株高产碱性蛋白酶菌株HHT597，经分子生物学鉴定为Bacillusaltitudinis。该菌株生长的最适pH8.5，最适生长NaCl浓度范围较广（1-3%），嗜碱、嗜盐菌；该菌株可在碱性条件下产生碱性蛋白酶，酶活可达到47.24U/mL。4.HHT597菌株所产生的碱性蛋白酶在60℃高温的时候仍具有

6、良好的稳定性，在NaCl浓度为5%较高的条件下仍具有活性，对于4种底物均具有可分解其蛋白质的特性，具有潜在的应用价值。关键词嗜盐碱菌，盘锦红海滩，高通量测序，碱性蛋白酶IStudyonbacteriadiversityofPanjinRedBeachandonealkalineproteaseproducingstrainAbstractPanjinRedBeachisauniquewetlandresourcesinLiaoningprovince.Itkeepsitsuniquenaturalappearancebecauseitwas

7、rarelyinfluencedbyartificialcondition.ThereisinplentyofmicrobialresourcesinPanjinRedBeach,itwillmakecontributiontodiscovernewmicrobialresourcesandinternalsoilmicrobialcommunitycompositionthroughinvestigationandresearchonthesoilmicrobes,usingbiologicalmethodstoscreenmicrobi

8、alresourceandthemicrobialdiversity.Itisalsoofgreatsignificancetoexploretheoriginoflifeand