PGF2α保护2型糖尿病患者并发非增殖性糖尿病视网膜病变的研究

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1、分类号：R774.1学校代码：10062密级：学号：2014601097博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：PGF2α保护2型糖尿病患者并发非增殖性糖尿病视网膜病变的研究TITLEPGF2αProtectingagainstNon-proliferativeDiabeticRetinopathyinType2DiabeticPatients一级学科：基础医学二级学科：医学生理学论文作者：彭丽媛导师：艾玎教授天津医科大学研究生院二〇一七年五月分类号：R774.1学校代码：10062密级：学号：2

2、014601097学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：PGF2α保护2型糖尿病患者并发非增殖性糖尿病视网膜病变的研究TITLEPGF2αProtectingagainstNon-proliferativeDiabeticRetinopathyinType2DiabeticPatients一级学科：基础医学二级学科：医学生理学论文作者：彭丽媛导师：艾玎教授天津医科大学研究生院二〇一七年五月天津医科大学博士学位论文中文摘要非增殖性糖尿病视网膜病变（Non

3、-proliferativediabeticretinopathy,NPDR）是2型糖尿病（Type2diabetes,T2D）患者最主要的早期微血管并发症。由长期持续的高糖引起，主要损伤视网膜微血管，表现为视网膜微血管渗漏、血管壁变薄、功能性视网膜微血管减少。血糖、血压和糖尿病病程是NPDR的主要危险因素。一般病程大于10年的T2D患者中，在无高血压等既往史的前提下，虽经过良好的血糖控制，仍有部分患者伴发糖尿病视网膜病变，但具体机制仍不十分明了。有研究表明，增加膳食中多不饱和脂肪酸（Polyunsaturatedfa

4、ttyacids,PUFAs）的比例，可降低良好控制的T2D患者罹患NPDR的概率，同时能够减轻已患NPDR患者的视网膜病变严重程度。对NPDR的预防，可有效降低T2D患者更严重糖尿病视网膜血管损伤的发生，具有重要的临床意义。本课题组的前期研究建立了高通量、高灵敏度、高特异性的PUFA靶向代谢组学方法，本课题旨在系统阐明T2D病程10年以上并发和不并发NPDR患者血浆中，Omega-3PUFA（EPA和DHA）和Omega-6PUFA（AA）代谢谱的变化，从PUFAs代谢谱的整体变化揭示与NPDR发生相关的代谢产物，并

5、进一步在离体细胞和在体动物水平阐明机制，以期为NPDR提供新的治疗思路和潜在靶点。我们首先招募病程大于10年的T2D患者，并将入组的患者按照眼底情况，分为T2D+NDR组和T2D+NPDR组。组间年龄、性别和糖尿病病程无统计学差异。收取入组患者血浆及各项临床资料，利用靶向代谢组学的方法，测定患者血浆中PUFAs代谢谱。结果表明，与T2D+NDR组患者血浆相比，AA、DHA和EPA的代谢产物在T2D+NPDR组患者中呈现总体下降的趋势。而所有代谢产物中，只有前列腺素F2α（ProstaglandinF2alpha,PGF

6、2α）水平在T2D+NPDR组患者血浆中显著低于T2D+NDR组，具有统计学意义。Spearman单因素相关分析表明，PGF2α对NPDR的发生具有保护作用。而Logistics回归分析结果则说明，PGF2α与血糖、血压和糖尿病病程一起，是NPDR的相关因素，且PGF2α是保护性因素。在细胞水平上，视网膜周细胞的移动性在NPDR中起关键的作用。持续高糖降低了视网膜周细胞的移动性，从而增加血管通透性和变性，导致NPDR早期症状，如渗出和血管瘤。我们分离了原代牛视网膜周细胞，在高糖（25mMD-glucose）条件下，用P

7、GF2α（100nM）干预视网膜周细胞，通过transwell和I天津医科大学博士学位论文粘附实验分别证实，PGF2α可促进周细胞的迁移和粘附。进一步对粘附细胞进行细胞免疫荧光染色，结果表明，PGF2α可促进视网膜周细胞骨架蛋白极化。说明PGF2α是通过骨架蛋白极化促进了视网膜周细胞的迁移和粘附。FP受体（ProstaglandinFreceptor,FPreceptor）是PGF2α目前已知的特异性受体，我们使用FP受体特异性抑制剂（AL8810）干预细胞，发现PGF2α对视网膜周细胞迁移和粘附的作用基本完全消失，接

8、近于对照组水平，细胞骨架蛋白也倾向于去极化状态。说明PGF2α是通过FP受体对视网膜周细胞的移动性进行调节。已有研究指出，FP受体是G-蛋白偶联受体（G-proteincoupledreceptors,GPCR）超家族的成员之一，可促进Rho的激活，从而促进细胞骨架蛋白的重排。因此，通过Active-RhoApulldown实验，