《薄层色谱法概述》PPT课件

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1、第四章薄层色谱法8/26/20211概述1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，推动了这一技术的发展。因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪器化，并实现了计算机化。8/26/20212薄层色谱与高效液相色谱的差别（特点）固定相和流动相TLC——流动相流动靠毛细作用力，流动相选择较少受限制，固定相不用再生。而HPLC是在封闭的系统内，流动相

2、流量靠泵控制，溶剂选择受检测器限制，固定相需再生。样品处理TLC要求没有HPLC严格。8/26/20213色谱分离TLC可同时分离多个样品，并可采用相同或不同溶剂进行同向或双相多次展开，通常采用正相色谱，色谱后衍生化方便。HPLC一次只能分离一个样品，通常采用反相色谱，色谱后衍生化受限制。对污染物抗受力强TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附物质均无影响。HPLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附物质均有大的影响。8/26/20214薄层色谱系统薄层板未改性固定相硅胶—为使用最广泛的薄层材料氧化铝—有碱性、中性、酸性硅藻土—为

3、化学中性吸附剂纤维素—天然多糖类聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性。8/26/20215表面改性固定相疏水改性硅胶——化学键合烷基亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二羟基等，薄层板极性介于极性吸附剂和疏水改性剂之间（极性次序：硅胶﹥氨基﹥氰基﹥二羟基﹥反相）。表面改性纤维素——乙酰化纤维素药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一般要求10–40um。8/26/20216载板——玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备

4、用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。黏结剂无机黏结剂——石膏（硫酸钙），添加石膏的吸附剂以字母“G”表示。没有黏结剂的吸附剂以字母“H”表示。无机黏结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄层强度差。8/26/20217有机黏结剂——羧甲基纤维素钠（CMC）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色剂。荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指示剂，常用的荧光指示剂在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。含有荧光

5、指示剂的商品吸附剂以“F”表示，并以下标注明其激发光波长。例硅胶HF2548/26/20218薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起的凹坑和龟裂。例：硅胶板（粒度10～40um）硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水，研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅速研磨均匀，立即涂铺。硅胶或硅胶G——以CMC为黏合剂。配制0.2%～0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀浆。8/26/20219反相薄层板制备——以不同链长的正构烷烃为固定液,配制成适当浓度的溶液(如5%硅酮油

6、乙醚溶液),浸渍硅胶板。薄层板活化涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同，如：硅胶110℃1h氧化铝110℃30min8/26/202110点样要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。手工点样工具：定容玻璃毛细管（1–5ul），微量注射器。8/26/202111自动点样LimomatIV喷样仪——样品

7、溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。特点：适合于大量稀样品溶液的喷加；条带宽度不超过2mm，有利于改善分辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要求薄层板强度高。自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。药典规定：点样基线距底边2.0cm,样点直径2-4mm,点间距离约为1.5-2.0cm。8/26/202112展开方式多数采用直线形上行展开，薄层板水平角度以75为最佳。展开距离一般为10-15cm。多次展开——一次展开未达满意分离时，可将薄层板干燥后再次用同一种溶剂展开，可重复多次，直到混合物分离为止。分步展开——混合

8、物性质差别较大时，一种流动相不能有效分离时，可采用不同溶剂依次展开不同距离。8/26/202113连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对保留值。二维展开——在