《薄层色谱法基础》PPT课件

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1、薄层色谱法（Thin-layerChromatography，TLC）一前言二基本参数三薄层层析的操作四特殊的薄层五应用举例一.前言定义:继柱色谱和纸色谱之后发展起来的方法薄层色谱法通常指以吸附剂为固定相的一种液相色谱法。即将固定相在玻璃、金属或塑料等光洁的表面上均匀地铺成薄层，试样点在薄层的一端，流动相借毛细作用流经固定相,使被分离的物质展开。常用的薄层色谱法以吸附剂为固定相,属于吸附色谱的范畴3特点薄层色谱与液相色谱法比较HPLCTLC每次只能分析一个样品在一块板上点上多个样品同时进行分离对

2、样品制备要求高，必须不用毕一次弃去，可直接用含可吸留在柱上的杂质，否样品的粗提物点样则柱性能受损可用检测器种类较少展开后可用多种手段检测4薄层色谱与柱层析和纸层析比较(1)快速(数十秒~数十分钟)(2)分离效率高(多柱路)(3)灵敏度高(斑点扩散小,比纸色谱高10-100倍)(4)显色方法多样(腐蚀性显色剂)(5)图象易保存5二.基本参数o比移值（Rf）Rf=原点至组分点中心的距离/原点至流动前沿的距离组分A的Rf=a/c组分B的Rf=b/co相对比移值，即相对于某一物质x的Rf值，用Rx表示。

3、其定义为：Rx＝组分的Rf值／物质x的Rf值组分A相对于物质B的“相对比移值”RB=a/b6三.薄层色谱的操作o吸附剂的选择o薄层板的制作o展开剂的选择o点样o展开o定位与显色o薄层层析的定量测定7(一)薄层层析用的吸附剂89(二)薄层板的制作层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀地涂在在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥（110℃活化）后即可使用。10(三)薄层层析中展开剂的选择主要根据极性的不同来选择流动相

4、展开剂。各种展开剂按其极性不同排序为：烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<二甲胺<酯类<酮类<醛类<硫醇<胺类<酰胺<醇类<酚类<羧酸11选择薄层条件的简图Stahl设计的用以选择薄层条件的简图（1）为被分离化合物的极性（2）为吸附剂的活度（3）为展开剂的极性。若将这三个因素各自固定在圆周的三分之一，转动圆盘正中的三角形，如果角A指向极性物质，则角B指向活度小的吸附剂，角C就指向选用极性展开剂；如转到图2化合物的极性、吸附剂的活度及展开剂极性间的关系A’，B’，C’处则又要作另外的选择组合。12多元展

5、开剂中各种溶剂的作用Ø极性较大的溶剂可以使化合物在薄层上移动。Ø极性较小的溶剂降低极性大的溶剂的洗脱能力，使Rf值降低。Ø中等极性的溶剂往往起着使极性相差较大溶剂混合均匀的作用。Ø在展开剂中加入少量酸、碱可以使某些极性物质斑点集中，提高分离度。Ø用粘度太大的溶剂时需要加入一种溶剂以降低展开剂的粘度，加快展开速度。Ø例如环己烷-丙酮-二乙胺-水（10:5:2:5）这个系统中，水是极性大的溶剂，环己烷是极性小的溶剂，后者的加入可以降低分离物质的Rf值，丙酮起着混匀整个系统及降低展开剂粘度的作用，少量

6、二乙胺的加入控制了展开剂的pH值以使分离后的斑点不致拖尾，分离清晰。13在具体工作中，展开剂的选择还必须进一步通过实践，一般可用下列三种方法：(1)查阅文献(2)微型薄层：用小玻片铺上薄层，用各种经初步选择认为可能应用的展开剂展开，从而选择适当的展开剂，再用于一般的薄层层析。用微型薄层，节省材料和时间。(3)微量圆环技术14将试样溶液点于已准备好的薄层上，点成同样大小的圆点，用毛细管吸取各种经初步选择认为可能应用的展开剂，加到试样点中心，让展开剂自毛细管中慢慢流出进行展开。微量圆环技术1用环己烷

7、展开2用苯展开3用氯仿展开15(四)点样1.样品溶液一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂，最好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样，配成0.5%~1%的试液。2.点样量点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几ng，常用量为几至几十µg，制备型的分离可以点样到mg量。总之点样量随分离目的而定。3.点样方式最好是直径3—5mm的圆点。常用的点样方式a一般点样b径向点样c条状点样d线形小孔点样e样品填入沟槽径向展开与普通展开的区别4.点样容器Ø定容毛细管Ø微量注

8、射器Ø点样器(五)展开1.水蒸气的影响2.溶剂蒸气的影响3.展开槽4.展开方式5.几种新型的展开技术6.展开操作1.水蒸气的影响在吸附薄层色谱的展开过程中，空气的相对湿度以及展开槽中的水蒸气必须严格控制，微量的水也能对色谱分离结果产生较大的影响。硅胶薄层板吸附水蒸气的速度很快，0.25mm厚、20×20cm的薄层板在50%相对湿度中约3分钟就失去活性的一半，而15分钟时吸附的水分已达到最大值，因此，点样速度的快慢，空气相对湿度的大小，都可以影响分离以及重现性。适宜的相对湿度范围也决定于溶质和溶剂