骨髓增生异常综合征P15INK4B基因甲基化及药物去甲基化作用的研究

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1、骨髓增生异常综合征P15INK48基因甲基化及药物去甲基化作用的研究导师刘皿教授研究生叶，石摘要目的检测骨髓增生异常综合征(MDS)p15'NK4“基因甲基化状态;探讨5-氮杂一2，一脱氧胞嚓咙Cdecitabine)和三氧化二砷(arsenictrioxide,AS203)对MDS患者体外培养细胞的去甲基化作用。方法采用限制性内切酶联合PCR方法检测MDS患者骨髓单个核细胞p15INK4B基因甲基化状态，并以p-globinCp珠蛋白)基因扩增产物作为试验内参照，分析其甲基化率。体外培养经检测P15INK4“基因高度甲基化的MDS患者外周血单个核细胞

2、，加入decitabine和AS203进行处理，分析其甲基化率变化情况。结果低危组MDS患者均未发现p15INK4“基因甲基化，80%高危组MDS患者和66.6%MDS转化为急性白血病的患者发现p15INK4”基因高’度甲基化。经decitabine和As20:处理后，培养细胞的甲基化率由药物处理前的19.73%降至处理后的8.8210.06%，明显降低至原来的50%左右，两种药物间去甲基化效应无明显差别。结论骨髓增生异常综合征的发生与p15INK4“基因高度甲基化密切相关，且随病情进展，p15INK4B基因高度甲基化出现越频繁。decitabine和

3、AS203对MDS患者来源的体外培养细胞高度甲基化的p15INK4B基因具明显去甲基化作用，两种药物间去甲基化效应无明显差别。]NK4日关键词骨髓增生异常综合征;p15;基因甲基化;5一氮杂-2‘一脱氧胞nib;吮1三氧化二二砷STUDYONP15tNK49GENEMETHYLATIONINMYELODYSPLASTICSYNDROMESANDDEMETHYLATINGACTIVITYOFDECITA13INEANDARSENICTRIOXIDEMentorProfessorTINGLIUGraduatestudentXUESHIYEABSTRACTO

4、bjectiveTodetectthemethylationstatusofp15rNK4Bgeneinthepatientswithmyelodysplasticsyndromes(MDS),andinvestigatetheeffectsofdecitabineandarsenictrioxide(As203)todemethylatetheculturedcellsfromMDSpatient.MethodsThemethylationstatusofp15FNK413geneofthemononuclearcellsobtainedfromth

5、eMDSpatient'sbonemarrowaspirationwereanalyzedwithrestrictiveendonucleasescombinedwithPCRtechnique.日-globingenewassetasaninternalreferenceofthespecificamplifiedbandtoconfirmthedegreeofmethylation.TheculturedperipheralbloodmononuclearcellsfromaMDSpatient,inwhomthehypermethylations

6、tatusofp15INK4Bgenehadbeenidentified,waschosenastheexperimentaltargetcells.TheMDScellswasculturedwithdecitabineandAs203invitrotoexplorethechangeofmethylationdegree.ResultsTherewasnop15INK4Egenemethylationdetectedinthelow-riskgroupMDSpatients,butthisgenehypermethylationweredetect

7、edin80%patientsofhigh-riskgroupand66.6%patientsinMDSprogressingtoAMLgroup.AfterexposedtodecitabineandAsz03,themethylationdegreeoftheculturedcellsfelldownfrom19.73%to8.82-10.06%.Nosignificantdifferenceindemethylatingefectwasfoundbetweenthesetwoagents.ConclusionOurstudyhasshowedth

8、eresultsthatp15INK4Bgenehypermethylationisclose