sox7和sox17基因启动子异常甲基化在骨髓增生异常综合征中的预后价值研究

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1、复旦大学硕士研究生毕业论文SOX7和SOX17基因启动子异常甲基化在骨髓增生异常综合征中的预后价值研宄院系：华山医院血液科研究生：樊荣导师：王小钦教授导师组成员：陈波斌副教授许小平教授林果为教授复旦大学附属华山医院二零一二年四月目录中文摘要1英文摘要3、‘-6刖目第一部分引言15材料与方法…16结果……25讨论32小结……34参考文献35第二部分弓I言……37材料与方法…38结果……40讨论52小结……54参考文献55全文小结57综述58在读期间发表论文65致谢67复旦大学硕士学位论文中文摘要SOX7和SOX17基因启动子

2、异常甲基化在骨髓增生异常综合征中的预后价值研宄中文摘要第一部分S0X7和S0X17基因启动子异常甲基化抑制白血病细胞株中S0X7和S0X17基因表达目的：在急性髓系白血病细胞株THP-1和骨髓增生异常综合征（MDS)转白细胞株SKM-1中，探讨去甲基化药物5-氮杂-2-脱氧胞苷（DAC)处理对S0X7和SOX17基因表达和细胞增殖的影响；检测S0X7和SOX17基因在细胞株中甲基化状态，同时对甲基化PCR(MSP)技术的正确性进行验证。方法：使用2、4和8nmol/LDAC处理细胞株（THP-1和SKM-1)，在24h、48h和96h三个时间点

3、观察SOX7和S0X17基因表达变化。使用CCK-8法检测4

4、imol/LDAC药物浓度对细胞增殖的影响。采用MSP的方法检测细胞株S0X7和S0X17DNA甲基化状态，并用亚硫酸盐测序验证MSP技术的结果。结果：SOX7和S0X17基因在THP-1和SKM-1细胞株中均有表达，使用DAC处理后S0X7和S0X17基因mRNA表达均被上调（P<0.05)，并有浓度梯度和时间梯度效应，且THP-I细胞株S0X7和S0X17基因表达上调幅度较SKM-1高。4nmol/LDAC处理细胞后，发现细胞增殖减慢（P<0.05)，THP-1较SKM-1对药物

5、反应敏感。MSP结果发现，S0X7和S0X17基因甲基化DNA存在于THP-1和SKM-1细胞株中，亚硫酸盐测序验证结果与MSP结果一致。结论：THP-1和SKM-1细胞株中存在S0X7和SOX17基因的异常甲基化，基因表达水平在DAC处理后上调。亚硫酸盐测验验证了MSP试验的正确性，表明可以使用该方法进行大批量临床标本S0X7和S0X17基因甲基化检测。关键词：THP-1细胞株；SKM-1细胞株；S0X7基因；S0X17基因；甲基化；甲基化PCR;5-氮杂-2-脱氧胞苷复旦大学硕士学位论文中文摘要第二部分S0X7和SOX17基因异常甲基化在骨

6、髓增生异常综合征患者中的预后价值目的：研宄S0X7和S0X17基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征（MDS)患者中的预后价值。方法：采用前瞻性方法收集上海市中美联合白血病协作组2003年6月至2009年4月确诊的MDS患者，并进行随访，收集临床数据，了解其转归，分析生存率和预后影响因素。采用甲基化特异性PCR的方法检测了确诊的167例MDS患者骨髓标本DNA中SOX7和SOX17基因甲基化状态，评价其预后价值。以死亡或末次随访时间(2009年4月30日）为随访终点。以总体生存时间(overallsurvival,OS)和转白率作为反映MDS预后的

7、指标。Kaplan-Meier方法计算各个亚组的OS,单因素预后分析采用log-rank检验。X2检验和确切概率法估计转白率。将单因素分析中有意义的因素纳入COX回归模型进行多因素分析，以明确影响OS的独立预后因素。结果：在MDS患者中均存在SOX7和SOXI7基因异常甲基化，甲基化阳性率分别为58.1%和58.5%,有69(41.3%)例患者同时存在两个基因的甲基化。SOX7和SOX17基因甲基化率在不同WHO临床分型中有明显差异，高危组MDS甲基化阳性率高(P=0.011，P=0.002)。SOX7和SOX17基因甲基化阳性率随着IPSS积

8、分的增加而增加（P0.001，P=0.009)。生存分析提示SOX7和SOX17甲基化阳性患者的中位生存时间分别为16.50个月和18.50个月，相比非甲基化组的31.80个月和26.93个月明显缩短，具有统计学意义（P=0.012，P=0.021)。单独SOX7和SOX17基因甲基化不能预测转白率。但同时有SOX7和SOX17基因甲基化OS为13.23个月，明显短于一个基因甲基化阳性或两个基因甲基化均阴性的患者28.37个月（P=0.002)，二个基因甲基化阳性患者的转白率为27.54%，高于一个基因甲基化阳性或均阴性患者14.74%(P=0

9、.012)。结论：MDS患者中存在SOX7和SOX17基因甲基化改变，并且在MDS患者预后中有重要意义。SOX7和SOX17基因甲基化患者具有较短的生