滇重楼内生真菌及其甾体化合物的初步研究

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1、中国农业大学硕士学位论文滇重楼内生真菌及其甾体化合物的初步研究姓名：曹晓冬申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：周立刚20060601中国农业大学硕士举位论文中文攮簧中文摘要滇重楼属于延龄草科(Trilliaceae)重楼属多年生草本植物，主要分布予我国云南、四川、爨州等地。滇重楼魁一种重要的药用植物，主要以其干燥根状攀入药，根状蕉中含有的活性成分为C．27整体4霉+絮的蘩蓣皂营元朝偏诺皂蛰元及其配耱体。植物态生蓥(Endophyte)怒撂那些在英生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物组织硪器官内部的真菌或细菌，宿主不袭现出外程病害症状。本论文对滇重

2、楼(Par妇polyphyllavat．yunnanens船(Franeh)Hand)内生真黼的分离和鉴定、潼体纯会貔蓉蓣皂营元ELISA梭测条纷的摸索、内生囊蘩孛警髂豫合辏分辑、肉生囊嚣鬟取物的抗菌活性进行初步研究，得出以下结果。1、本研究首次对滇重楼根状摹内擞真菌分离的方法进行探讨，对根状茎的表面消毒时间、分褰邦位彝培莽綦约选择遴纷摸索，获褥较尧理想瑟分离效莱。莛分离弱肉生寞蔫133撩，撮攒其形态特征，取28株代表性的真菌，缀鉴定隶属于10个属，分别为酵母属(Candlda)(No．1)、腐霉属(Pythium)(No．7)、艇核菌属(Rhizocton

3、ia)(No．9)、本霉属(Trichoderma)(No．36)和景援拣瘫'羲(Cylindroctaditon)(No，108)各1拣，诲霉震(Penieillium)(No。15和No．65)2椿，头孢繇属(Cephalosporium)(No．46、No+73和No．84)、曲霉属(Aspergillus)(No．47、No．55和No．61)和拟青霉属(Paecilomyces)(No．60、No．80和No．引)各3株，镰孢菌属(Fusarium)(No．14、No，24、No。32、No。38和No．62)5撩。2、当采用ELISA检测时，包被

4、物的稀释倍数为1：50，=抗的稀释倍数为l：400，当薯蓣辖苷元浓度在2．44×10’6mg／mL-6．25x104mg／mL范围内，浓度自然对数与吸光值之同存在较好的线性美系。特吴瞧稔测显示，鬻蓣皂营元抗体相对予耪甾醇、昏镰警酵、麦角甾醇静特辩性较好。3、Liebermann—But-chard显色检测25、38、46、73、125号菌株的菌熊悬浮液甾体化合物产率较勰；ELISA梭测9、25、38、46、125号菌株的菌丝悬浮液中薯蓣皂蛰元及其髓生物的含鬣较赢；TLC裣溯袭锈：80、8l、84、113号菡株菌熊正丁醇挺取物中可能材馨蓣亳替元；47、79、8

5、0、81、108、l13、130号荫株的菌丝提取物中可熊有麦角甾黼；14、65、130号菌株的菌液提取物中可自E有麦熊鲻酵。此铃，7、32、勰、55、84、t25菌株的滤渡正丁酵提取物，9、15、32、36、38、46、61、62、73、84、119、125菌株的菠熊正丁醇携取物串可糍还含有其他掰体类纯含物。4、2s株内生囊蘸正了’蓦錾攫取物抗壤涟性检测教明，在萤激难丁酵提取物孛，24母蘧橡窝SS号菌撩正丁醇提取物的抑蕾活性较强；在藩丝正丁簿提取物中，9号菌株和130号菌株正丁醇掇取物的抑菌活性较强。本辑究垮为继续分离溪璧楼内生囊壤、了解蠹生囊蓥中躲瓣俸讫台

6、貔糖类，鞋及撬蘩活鳇成分奠定基础，同时也为阐明藏楼内生真黼与宿主在次生代谢方耐的协同进化规律提供依据。关键谶：滇重楼；内生真菌；掰体化台物；薯蓣皂蛰元；Liebennann—Burchard反应；酶联免疫吸辩测宠(ELISA){薄瑟层擀(TLC)ABSTRACTParispolyphyllavar．yunnanens蠡(Franch)Hand(Tritliaceae)，aperennialherbmostlydistributinginProvincesofYunnan,SichuanandGuizhouofChina,hasbeenusedasanimpo

7、rtantandtraditionalChinesemedicinalplantforitsrhizomescontainingsteroidswithaC*27skeleton，whichmainlyconsistofdiosgenin，pennogeninandtheirglycosides．EndophyteWaSdefinedasanorganismswhichinhabitplantorgans，andcallcolonizeinternalplanttissueswithoutcausingapparentdiseasetotheirh。s

8、s8

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10、sometimeintheirlifecycles