EID3基因在大肠癌传代细胞mRNA的表达及其克隆

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1、·38·中国癌症防治杂志2012年3月第4卷第1期ChinJofOncolPreyandTreat，Mar2012，Vo1．4，No．1EID3基因在大肠癌传代细胞mRNA的表达及其克隆王钦富李志牟红梅徐娜张雪梅韩慧作者单位：116622大连大连大学免疫学研究所；大连中心医院检验科【摘要】目的研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值。方法用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库，发现了一类似于肿瘤抑制基因(E1A基因)的EID3基因(NM_001008394．1)，构建原核表达载体pET32k—EI

2、D3，IPTG诱导重组EID3蛋白质的表达，并利用NiNTAHisBind树脂纯化该重组蛋白质。用RT—PCR技术研究EID3mRNA在正常组织和大肠癌传代细胞的表达。结果经PCR扩增成功获得1002bp的人EID3基因，测序正确。在大肠杆菌中目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的10％，SDS．PAGE及Westernblot分析显示，其相对分子质量为39000KD，纯化后的6xHisEID3纯度可达92％。通过RT—PCR分析发现，EID3基因在43例大肠癌传代细胞株中有39例阳性，阳性率为90．7％。在正常组织中，除睾丸

3、组织不表达或有极低水平转录外，余均不表达。结论EID3基因克隆、表达及纯化的成功，为其今后的肿瘤诊断和肿瘤多肽疫苗治疗研究奠定了基础。EID3mRNA表达检测用于诊断大肠癌，可能具有高特异性和高敏感性的特点。EID3蛋白在大肠癌患者中能够诱导机体的抗体免疫应答，可能成为一个新的大肠癌相关性抗原分子，其用于诊断大肠癌的可行性，有待进一步深入研究。【关键词】大肠癌；EID3；克隆；mRNA【中图分类号】R734．3+8【文献标识码】A【文章编号】1674—5671(2012)01—05doi：10．3969／j．issn．16

4、74—5671．2012．01．O9EID3genecloningandmRNAexpressionanalysisincoloncancercelllinesWANGQin—fu，LIZhi，MUHong—mei，XUNa，ZHANGXue-mei，HANHui(InstituteofImmunology，DalianUniversity，Dalian116622，P．R．China；DalianCentralHospital，Dalian116021，P．R．China)Correspondingauthor：WANG

5、Qin—fu；E—mail：qinfuwang@126．【Abstract】ObjectiveToclonethegeneencodingthenovelcoloncancer-associatedantigenE／D3andinvestigatethepossibilityofusingEID3mRNAexpressiontodiagnosepatientswithcoloncancer．MethodsScreeningofatestiscDNAlibraryusingserafrompatientswithcolonc

6、ancerledtodiscoveryoftheEID3gene(NM_O01008394．1)，similartotumorsuppressorgeneE1A．ThepatternofEID3mRNAexpressionwasinvestigatedinnorrn~tissueandcoloncancercelllinesusingreversetranscription—PCR(RT—PCR)．ResultsTheEID3gene(1002bp)wasclonedbyPCRandoverexpressedinE．col

7、iatlevelsreaching10％oftotalprotein．Themole—cnlarweightwasconfirmedtobe39kDabySDS—PAGEandWesternblot，anditwaspurifiedto92％homogeneity．ThegeneencodingEID3islocatedonchromosome19q13．2．whichcontainsoneexon．RT—PCRanalysisdetectedthegenein39of43(90．7％)coloncan—eercellli

8、nes，whileEID3mRNAwasundetectableinallnormaltissuesexaminedexcepttestis．ConclusionsEID3mRNAdetectionmayprovetobeahighlysensitiveandspecifictechniquetodia