表儿茶素及其衍生物表儿茶素没食子酸酯通过

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1、天津中医药２０17年3月第34卷第3期200ＴｉａｎｊｉｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅMar.２０17熏Ｖｏｌ．34Ｎｏ．3DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2017.03.15表儿茶素及其衍生物表儿茶素没食子酸酯通过MAPK-ERK44/42通路抑制前列腺间质细胞增殖*焦婵媛，景春晖，员小婷，苗琳（天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，方剂学教育部重点实验室，天津300193）摘要：[目的]探究锁阳中表儿茶素（EC）及其衍生物表儿茶素没食子酸酯（ECG）对前列腺间质细胞WPMY-1增殖的影响及其机

2、制。[方法]体外培养WPMY-1细胞，加入不同剂量的ECG和EC，用噻唑蓝（MTT）法检测对细胞增殖的影响，用聚合酶链反应（PCR）和蛋白免疫印迹（Westernblotting）法检测对增殖相关抗原PCNAmRNA和蛋白水平表达的影响；用Westernblotting法分别检测ECG和EC对MAPK通路ERK44/42、P38、SAPK/JNK激活的抑制作用；加入ERK44/42激动剂C6-Ceramide（C6）及P38、SAPK/JNK联合激动剂Anisomycin（ANI）后，用MTT法检测对ECG和EC抑制细胞增殖的影响。[结果]1nmol/L至10μmol/

3、L的ECG和EC均可以明显抑制WPMY-1细胞的增殖（P＜0.01）。10nmol/L的ECG和EC可以明显抑制WPMY-1细胞中PCNAmRNA和蛋白水平的表达（P＜0.05）。ECG和EC均能抑制ERK44/42和SAPK/JNK的磷酸化，但对P38的磷酸化作用不明显；加入C6后，ECG和EC抑制WPMY-1增殖的能力明显降低（P＜0.05或P＜0.01），加入ANI后，则细胞增殖能力改变不明显。[结论]ECG和EC通过ERK44/42抑制前列腺间质细胞增殖，这可能是其抗良性前列腺增生的重要机制之一。关键词：表儿茶素没食子酸酯；表儿茶素；良性前列腺增生；细胞增殖；M

4、APK通路中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1672-1519（2017）03-0200-04良性前列腺增生症（BPH）是老年男性泌尿外科间质细胞WPMY-1为模型，研究ECG和EPI对其常见疾病，近年来随着人口老龄化程度不断加剧，BPH增殖的影响，并进一步分析其作用机制。[1]成为影响老年男性生活质量的常见因素。增生的前列腺细胞增殖加剧导致前列腺体积明显增大，给[2]患者带来尿频、尿不尽或尿失禁等排尿障碍，严重[3]者引起肾积水、肾衰竭。组织学上，前列腺由前列腺上皮细胞和间质细胞构成，临床上前列腺增生多以间质增生为主，因此抑制前列腺间质细胞的增殖成为抗前

5、列腺增生直接且有效的治疗方法[4]。A.表儿茶素结构式；B.表儿茶素没食子酸酯结构式图1表儿茶素和表儿茶素没食子酸酯的结构式锁阳是补肾助阳的传统中药，广泛用于治疗腰Fig.1EpicatechinandEpicatechingallatestructure膝酸软、精血亏虚、阳痿、滑精、肠燥便秘等疾病。在抗前列腺增生的治疗中，锁阳是多种中成药复方中1材料与方法[5-6]的常见药物之一，临床使用疗效良好，但其抑制1.1材料与试剂前列腺间质细胞WPMY-1BPH的机制尚不十分清楚。表儿茶素（EC）及其衍生（ATCC），锁阳单体表儿茶素没食子酸酯ECG和表物表儿茶素没食子酸酯（

6、ECG）是其两种重要药用成儿茶素EC（一方科技），C6-Ceramide（Santacruz），分，结构上均属黄烷醇类（见图1）。笔者选择前列腺Anisomycin（Cellsignal），胰蛋白酶（Gibicol），DMEM培养基（ＫＣｃｅｌｌ），胎牛血清（Hyclone），噻唑蓝（MTT，*基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目索莱宝），二甲基亚砜（DMSO，康科德），反转录试剂（81303293）；天津市应用基础及前沿技术研究计划青年基金盒（Promage），逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）试项目（14JCQNJC13400）。剂盒（Promage）实时定

7、量PCR仪（BIORAD），Trizol作者简介：焦婵媛（1991-），女，硕士研究生在读，从事中药药理学研究。（Invitrogen），PCNA引物序列GACCGCAACCTGGC通讯作者：苗琳，E-mail：mmmlin7180@hotmail.com。CAT（上游）GCGTTATCTTCGGCCCTTAGT（下游）；２０17年3月第34卷第3期天津中医药Mar.２０17熏Ｖｏｌ．34Ｎｏ．3ＴｉａｎｊｉｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ201GAPDH序列GGGGAGCCAAAAGGGTCATC