盐析萃取偶联柱层析分离纯化血浆蛋白

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1、专业学位硕士学位论文盐析萃取偶联柱层析分离纯化血浆蛋白IntegratedProcessofSalt--outExtractionandColumnChromatographyforSeparationandPurificationofPlasmaProteins学311l8024完成日期：2Q131Q5大连理工大学DalianUniversityofTechnology大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已

2、经发表的研究成果。也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目：丝堑舞熟造毯堑巨堑生蔓缝丝垒盗壹国作者签名：蕉硷诠日期：竺!至年—正月_

3、堕日大连理工大学专业学位硕士学位论文摘要血浆蛋白由数百种具有广泛生理功能的蛋白质组成，其中白蛋白与免疫球蛋白占据着血液制品中主要的市场份额。血浆成分十分复杂，目前工业上血浆蛋白的分离方法主要采用有机溶剂沉淀法、盐析法和柱层析，但这些方法尚存在着分离环境要求低温、分离纯化步骤繁琐、纯度和收率

4、低等缺点。本论文开展了亲水性有机溶剂盐析萃取偶合柱层析分离纯化血浆蛋白的研究，以期为血浆蛋白的分离纯化提供新方法。(1)首先考察了免疫球蛋白G(IgG)在亲水性有机溶剂盐析萃取中的分配规律，选取磷酸氢二钾、碳酸钠、柠檬酸钠三种盐分别与乙醇组成盐析萃取体系，考察了不同盐、醇含量对IgG在体系中分配的影响。结果表明，20％磷酸氢二钾(w／w)．14％乙醇(w／w)、19％碳酸钠(w／w)．13％乙醇(w／w)、25％柠檬酸钠(w／w)．19％乙醇(w／w)为三种盐析萃取体系的最佳组成，在这些条件下，IgG回收率分别为97．4％、93．1％、90．2％。采用

5、ELISA法检测了磷酸氢二钾一乙醇、碳酸钠．乙醇两种体系萃取后IgG的活性，发现经磷酸氢二钾体系萃取后，IgG活性基本维持不变，而经碳酸钠体系萃取后，IgG活性损失率达70％以上。(2)将20％磷酸氢二钾(w／w)一14％乙醇(w／w)盐析萃取体系调节pH至7．0后，直接从猪血浆中萃取IgG与白蛋白，盐析萃取能明显去除部分杂质蛋白，葡萄糖的去除率达51．82％。根据上相中富含盐的特点，选取疏水层析作为后续纯化手段，可得到较高纯度的白蛋白与IgG混合物，该混合物再经过阴离子交换层析后，可得到高纯度白蛋白和IgG，白蛋白和IgG样品经非还原SDS．PAGE

6、分析均显现单一条带，光密度扫描显示纯度大于99％。上述结果表明，亲水性有机溶剂盐析萃取偶联柱层析技术能够实现血浆蛋白的高效分离。和传统的盐析、冷乙醇法和柱层析法相比，具有操作条件温和，分相时间短，操作简便，易于放大，目标蛋白纯度高等优点，具有工业化应用的前景。关键词：血浆蛋白：亲水性有机溶剂盐析萃取：白蛋白：免疫球蛋白G：分离纯化：柱层析IntegratedProcessofSalt-outExtractionandChromatographyforSeparationandPurificationofplasmaproteinsAbstractPla

7、smaproteinconsistofhundredsofproteinswithnumerousphysiologicalfunctions，andalbuminandimmunoglobulinsoftheplasmaproteinoccuppyagreatshareofthebloodproductsmarket．However，theseparationandpurificationofthemarequitedifficultbecauseofthecomplexityofblood．Organicsolventprecipitation，s

8、alting—outandcolumnchromatographyarewidelyusedtOseparatesuchproductsinindustry，however，thedisadvantagesofthesemethods，suchaslowoperationtemperature。nlulti。stepsseperationandlowrecoveryrate，cannotbeignored．InthiSthesis，anintegratedmethodofhydrophilicorganicsolventsalting．Outextra

9、ction(HOS—SOE)andcolumnchromatographywasdevelop