用狂犬病毒核蛋白基因小干扰RNA库抑制狂犬病毒复制和感

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1、第21卷3期中国病毒学21（3）：238-2432006年5月VIROLOGICASINICAMay2006用狂犬病毒核蛋白基因小干扰RNA库抑制狂犬病毒复制和感染的研究**王继麟，朱家鸿，徐葛林（武汉生物制品研究所基因工程室，湖北武汉430060）InhibitionofRabiesVirusReplicationandInfectionbyRabiesVirusNucleoproteinGenesiRNACocktail**WANGJi-lin，ZHUJia-hong，XUGe-lin(WuhanInstituteofBiologicalProduct

2、s,Wuhan430060,China)Abstract：SmallinterferenceRNAmixtures(siRNACocktails)ofRabiesvirus(RV)Ngene,PgeneandGgenewerepreparedbydigestinglongdouble-strandedRNA(dsRNA)withRNaseⅢ.ThesesiRNAcocktailsweretransfecteingintoBSRorMNAcellmonolayersandthedirectimmunofluores-cenceassay(FA)wasused

3、tomeasurethereplicationandinfectionofRVonthecellmonolayers.WefoundthatthesiRNACocktailsofNgenecanobviouslyandstablyinhibitthereplicationandinfectionofRV.AdescentofmRNAofNgenewasalsodetectedbyRT-PCR.Underthesamesituation,thesiRNACocktailsofPgeneorGgeneshowednoorweakinhibitiontother

4、eplicationandinfectionofRV.AlloftheseresultsprovideabasisforselectingtargetgeneofRVinRNAitreatmentanditsfurtherapplication.Keywords：Rabiesvirus(RV)；siRNACocktail；Replication；Inhibition摘要：采用RNaseⅢ消化长片段双链RNA的方法，制备了狂犬病毒N基因、P基因和G基因小干扰RNA库（siRNACocktail）。将siRNA转染BSR和MNA细胞单层后，采用直接免疫荧光法观

5、察发现，N基因siRNACocktail能够对RV的复制和感染产生明显和稳定的抑制作用，并且通过RT-PCR在转录水平探测到mRNA产量的降低；而P基因或G基因siRNACocktail对RV的复制和感染不产生或仅产生弱的抑制作用。这一结果为RNA干扰在RV研究中靶基因的选择及进一步的应用提供了依据。关键词：狂犬病毒（RV）；小干扰RNA；复制；抑制中图分类号：R373.9文献标识码：A文章编号：1003-5125(2006)03-0238-06RNA干扰(RNAi)是近年来兴起的通过小干扰性病狂犬病的病原体，该病一旦发病则100%死亡，RNA在转录后水平

6、抑制基因表达，进而研究基因功目前对狂犬病的预防主要依赖于接种疫苗，尚无治[1~3]能和基因治疗的一种新的技术方法。已有文献疗狂犬病有效方法。本研究将RNA干扰技术应用于表明，应用RNA干扰在抑制诸如SARS病毒、乙抑制RV复制与感染。我们尝试采用RNaseⅢ消化长[4~6]肝病毒、艾滋病毒等病毒的复制与感染的研究片段双链RNA技术制备狂犬病毒N基因、P基因和已获得了令人鼓舞的进展。但目前尚未见有狂犬病G基因小干扰RNA库（siRNACocktail），观察其对毒的RNAi文献报道。狂犬病毒复制的抑制效果及差异，初步确定RNAi狂犬病毒（Rabiesviru

7、s,RV）是引发人兽共患烈在抑制狂犬病毒复制的研究中应用的可行性，并通收稿日期：2005-10-26，修回日期：2006-01-25作者简介：王继麟(1959-），男，湖北省籍，副研究员，博士生，研究方向为分子病毒学和免疫学。**通讯作者.Correspondinganthor.Tel:027-88840487,E-mail:jianchou70@hotmail.com王继麟,等.用狂犬病毒核蛋白基因小干扰RNA库抑制狂犬病毒复制和感染的研究239过RNAi比较确定这些狂犬病毒基因中对何种基因N-3T7：5’T7-TCTTATGAGTCACTCGAATAT

8、GTC-及其蛋白的抑制含对RV的复制和感染产生更大的3’(1425