雌二醇对脑缺血再灌注损伤脑保护作用机制的研究

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1、华中科技大学同济医学院博卜研究生毕业论文雌二醇对脑缺血/再灌注损伤脑保护作用机制的研究博士研究生卢宏导师方思羽教授(华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科，武汉430022)中文摘要流行病学显示，绝经期后的妇女比年轻妇女更易患神经变性疾病如Alzheime's和帕金森氏病、缺血性脑损伤，如中风、记忆和认知功能障碍。体内外一些研究显示雌激素无论年轻和年老均可保护大脑免于损伤。近年对雌激素脑保护机制的深入研究，越来越多的证据表明雌激素对缺血性卒中具有神经保护作用。热休克蛋白是一组高保守的蛋白质，在环境的应激下被诱导出。体内外研究证明HS

2、P70具有保护神经元的作用，雌激素能否使这一具有神经保护作用的应激蛋白表达上调，目前在局灶性脑缺血/再灌注损伤动物模型中未见报导。神经营养因子(主要包括NTFs,GDNF等)，是一类对神经细胞的发生、发育、分、再生、衰老、死亡和疾病等有着直接或间接作用的蛋白质。体内外研究NTFs及GDNF对脑缺血具有保护作用。但由于外源性BDNF,NGF,GDNF不能透过血脑屏障，如何应用于动物实验和临床只有将它们行鞘内注射，但存在单次注射作用时间短，需反复多次注射，且易引起继发性损伤的问题。近年来，一方面人们把目光转向基因治疗，构建含有神经营养因子的

3、各种病毒载体对缺血性脑卒中进行实验性基因治疗，目的使缺血性卒中的实验动物脑内神经营养因子表达增高，以实现神经营养因子脑保护减轻脑损伤的目的，但基因治疗作为探索可能的给药途径仍存在诸多问题。另一方面，开发一些药物，能通过这些药物干预治疗促使内源性BDNF,NGF,GDNF及其受体的表达，也将成为药理学干预的新策略。雌激素能否使局灶性脑缺血/再灌注损伤后内源性神经营养因子表达上调，从而起到治疗作用，目前国内外未见有报道。脑缺血中存在着细胞的凋亡尤其是在半暗带。Bcl-2是重要的抗凋亡蛋白，caspase-3是凋亡级联反应中重要的效应蛋白，雌

4、激素能否在凋一亡级联反应中发挥作用值得进一步研究。，华中科技人学同济医学院博IAif"T%生毕业论文因此婀究通过建立局灶性脑缺血/再灌注实验动物模型，研究雌二醇对局灶性脑缺血/再灌注损伤后HSP70,BDNF,NGF,GDNF,bcl-2及caspase-3的影响，以探讨雌二醇对脑保护的分子机制，为雌二醇治疗脑梗死提供理论上依据，探索能使有益基因表达上调的新的治疗药物。!第一部分雌二醇对脑缺血/再灌注损伤HSP7”表达的影响目的:观察雌二醇对脑缺血/再灌注损伤HSP70表达的影响，研究雌二醇脑保护的分子机制，为雌二醇治疗缺血性卒中提供理

5、论依据。方法:将72只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组，局灶性脑缺血2h再灌注3h,6h,12h,24h组，4组及雌二醇治疗(100ug/kg)+脑缺血2h再灌注3h,6h,12h,24h,4组每组动物8只，假手术组8只口将雌二醇溶于精制植物油内于脑缺血前7天每天腹腔注射治疗，假手术组和脑缺血/再灌注组同等条件下给予相同体积的植物油腹腔注射。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型，采用连续切片免疫组化技术检测脑组织中HSP70o结果:1.血管内皮在假手术组，脑缺血/再灌注，雌二醇治疗组均表达。2.假手术组皮层和纹状体无HSP

6、70表达。3.雌二醇治疗组与脑缺血/再灌注组比较，在再灌注3h,6h表达无变化，4.雌二醇治疗组HSP70表达，在脑缺血/再灌注后12h皮层明显高于脑缺血/再灌注组。5.在雌二醇治疗组24h较脑缺血/再灌注组HSP70表达仍有差别。结论:结果提示HSP70是缺血后神经元损伤的一个敏感指标，它在局灶性脑缺血/再灌注损伤中发挥重要作用，给予雌二醇预先干预，可以增加脑缺血/再灌注脑组织内神经元HSP70的表达，为雌二醇治疗缺血性卒中提供了理论依据，为缺血性卒中提出了新的干预治疗策略。第二部分雌二醇对脑缺血/再灌注损伤BDNF,NGF,GDNF

7、表达的影响目的:观察雌二醇对脑缺血/再灌注损伤BDNF,NGF,GDNF表达的影响，研究雌二醇与上述神经营养因子的关系，探索雌二醇脑保护分子机制的新观点。方法:将72只Wistar大鼠随机分为假手术组、局灶性脑缺血2h/再灌注3h,6h,12h,24h组及雌三醇治疗(100ug/kg)+fli}j缺血2h/再灌注3h,6h,12h,24h组，每时间华中科技人学同济医学院博卜研究生毕业论文点8只，假手术组8只，其中取每时间点中5只及假手术组5只行RT-PCR。将雌二醇溶于精制植物油内于脑缺血前7天每天腹腔注射治疗，假手术组和脑缺血/再灌注

8、组同等条件下给予相同体积的植物油腹腔注射，采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型，采用RT-PCR和连续切片免疫组化法检测各组脑中上述神经营养因子mRNA和蛋白的表达。户结果:(1)RT-PCR显示