脂蛋白脂肪酶基因调节区和外显子2～4的突变研究

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1、天津医科大学硕士学位论文脂蛋白脂肪酶基因调节区和外显子2～4的突变研究姓名：杨宇虹申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：解用虹20030501LPL基因调节区和外显子2-4的突变研究摘要脂蛋白脂肪酶(LPL)是脂蛋白代谢的关键酶，LPL基因变异常可导致异常脂蛋白血痘。异常脂蛋白血症是最常见的代谢性疾病之一，也是动脉粥样硬化的重要危险因子。为探讨中国人群LPL基因常见突变的种类、频率以及其可能产生的影响，我们利用聚合酶链反应．单链构象多态性(PCR．SSCP)分析技术对140例人群L

2、PL基因转录起始位点上游140bp以内的调节区和外显予2~4(包括内含子_夕b显子交界区)进行了突变的筛查。在140例样品中检出2例发生在外显子4扩增区域的可疑突变，通过PCR产物直接测序，证实均为内含孑3受位剪接位点上游6bp的C—T转换突变杂合子，未检出其他突变。2例LPL内含子3受位剪接位点上游6bp的C—T转换突变的携带者均为高甘油三酯血症患者(TG分别为5。90mmol／L和6．62mmol／L)，占被检商甘油三酯血症患者(TG>3．95mmol／L)的4．44％(2／45)，而在89例

3、血脂正常人群中未检出该突变。结合国内外相关文献和分子流行病学调查，以及关于突变基因结构和作用机制的讨论，显示该突变可能是中国人高甘油三酯血症的遗传易患因素之～。在140例人群中，未检出LPL基因5’上游140bp以内调节区突变，提示国人该区域的突变相当罕见。I关键词】脂蛋白脂肪酶聚合酶链反应．单链构象多态性剪接突变调节突变LPL基因调节区和外显子2-4的突变研究AbstractLipoproteinlipase(LPL)isakeyenzymeoflipidmetabolism，itsprimar

4、yfunctionisthehydrolysisofthecoretriglyceridesofcirculatingchylomicronsandverylowdensitylipoproteins．ThemutationsintheLPLgenemayleadtothechangeofLPLactivitiesandmasses．ToscreentheLPLgeneformutationsinChinesepopulationandtostudythepossibleeffectsofthem

5、utationsonplasmalipids，theLPLgene(alltranslatedexons，intron．exonboundariesandtheups仃eam5’flankingregion)WasexaminedbyPCR—SSCPanalysis，andthePCRproductsshowingabnormalpauemonSSCPweresequencedusingdideoxy·mediatedchain—terminationmethod．Twomutationswere

6、foundin140Chinesepeople，bothofthemwereasingletransition(C—T)atsixbpupstreamfromacceptorsplicingsiteofintron3．Themutationinintron3oftheLPLgenemaybeoneofthegeneticrisksforhyperglyeeridemiainChinesepopulation．Inaddition，noneoftheregulatorymutationswerefo

7、undinthisstudy．However，TheoccurrencesandimpactsofallthepossiblevariantsintheLPLregulatorygeneshouldbefllrtherinvestigated．[Keywordsllipoproteinlipase(LPL)，polymerasechainreaction．singlestrandconformationpolymorphism(PCR—SSCP)，splicingmutation，regulato

8、rymutation．2．LPL基因调节区和外显子2~4的突变研究日U百脂蛋白脂肪酶(1ipoproteinlipase，LPL；EC3．1．1．34)是脂蛋白代谢的关键酶，其作用是将循环中乳糜微粒(chylomicron，CM)和极低密度脂蛋(verylowdensitylipoprotein，VLDL)转运的甘油三酯(triglyceride，TG)水解为甘油和游离脂肪酸，为外周组织提供营养和能量来源【I】。LPL质量和催化活性的改变必然会对血脂水平产生重要的影响，LPL基因也