羊膜对兔眼小梁切除术后成纤维细胞增殖抑制作用的定量研究

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1、内蒙古医学院硕士学位论文羊膜对兔眼小梁切除术后成纤维细胞增殖抑制作用的定量研究姓名：刘森玉申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：闫元奎2003.6.1中文摘要。目的应用细胞增殖指标核仁组成区相关嗜银蛋白(Argyrophilicnu—cleoarorganizerregions，AgNORs)，研究兔眼滤过道纤维细胞(Fibroblast，Fb)增殖规律及羊膜的抗增殖作用，并对其临床意义进行探讨。方法作兔眼高眼压模型，行双illld,梁切除术，一眼植入羊膜，另一眼作为对照而不植人羊膜。分别于术后的3、7、15、30天取兔眼滤过道组织作切片，作AgNORs及

2、皿染色，比较羊膜植入眼和对照眼FbAgNORs染色颗粒数量及既染色后纤维组织增生情况。结果(1)不同手术区羊膜植入眼FbAgNORs颗粒数量显著低于对照眼(P<0．01)，羊膜抑制率为：51．4％13．7％。(2)艇染色观察，羊膜植入眼纤维组织增生轻微，而对照眼组织增生明显。结论羊膜植入巩膜瓣下可有效抑制咬切口、巩膜瓣下及结膜瓣下Fb增殖活性，并且未见明显毒副作用。关键词小梁切除术成纤维细胞兔羊膜0ABSTRACTObjectiveT0investigatethere出哆offLbmblast(Fb)proliferationandtheeffectofAm

3、nioticMembraneaftertrabeculectomyinrabbits．MethodsHisto—chemistrymethodofAgNORsandHEwasusedtocounttheFbAsNOmgranulesofAmnioticMembraneeyesandcontroleyes．Results(1)TheAgNO如guanuleswerestatisticallydifferentbetweenAnmioticMembraneeyesandcontroleyes(P<0．01)．TheAmnJoticMembranesuppress

4、iveratewasfrom51．4％to73．7％．(2)FromHE，thefibmblastofAmnioticMembraneeyeswasproliferated出ghtly，anditincontroleyeswasevidently．ConclusionAnmioticmembrdnecansupresseffec—tivelytheactivityofFbwhichpmliferatodinscleractomyarea-subsclemflapareaandsubconjtmctiveflaparea．KeywordsTrabeculect

5、omy；Fibroblast；Rabbit；Alllnio吐cMem-0．前言羊膜对兔Itt更,b梁切除术后成纤维细胞增殖抑制作用的定量研究0小梁切除术是目前治疗青光眼最常见的手术方法之一，但常由于滤过道成纤维细胞增殖滤过泡瘢痕形成而导致手术失败。人们试图用各种抗纤维药物如5一F氟尿嘧啶(5一ru)c“、丝裂霉素C(MMc)幢J、环孢霉素A(csA)∞’等抑制纤维增殖，但随之而来的是副作用的增加【4J。最近报道应用羊膜移植能稳当地重建眼球表面，且羊膜移植覆盖区炎症反应轻微，新生血管和瘢痕形成少”J。我们试图将羊膜应用于小梁切除术，用敏感的细胞增殖指标核仁组成

6、区相关嗜银蛋白(A．,gyI叩hlienueleoarOr—ganiserregiom，A妒『0RB)标记n增殖活性，对羊膜的抗纤维化作用进行量化评价，为临床提供治疗的理论依据。1．材料与方法1．1实验动物：白色健康家兔40只(由内蒙古医学院动物室提供)，体重2—2．5Kg，雌雄不限。采用自身对照，小梁切除术植入羊膜者称为羊膜眼，另一眼不植入者为对照眼。术后第3、7、15、30天取滤过道标本作A刚ORs染色和HE染色。1．2主要试剂及仪器：手术显微镜(中国医科院ASOM2000型)，A斟0R5工作液(上海华美生物公司)，LKBV型超薄切片机(Leitz公司)

7、，Olympus双筒显微镜(日本Olympus公司)，甲基纤维素(天津晶明新技术开发有限公司)。I．3羊膜植片的制备：从刨腹产的健康人[排除含有人类免疫缺陷性病毒(fⅡv)、乙肝病毒(HBv)，丙肝病毒(HCV)及梅毒]胎盘上采取，剪成2cmx2em，用4．0xl伊u·rat“庆大霉素液清洗，放入9009·L“甘油瓶中，脱水24小时后，转移到另一甘油瓶中，密封放人4。C冰箱中保存。使用时用生理盐水冲去甘油，泡人4．0×106U·ml“庆大霉素BSS液中，复水30分后使用。1．4兔高眼压模型的制备：t％的卡因滴眼行局部麻醉，每眼抽取房水0．2ml，注入甲基纤维

8、素0．2ml，使之眼压在28—34mmHg(1mmH