肝型脂肪酸结合蛋白和脂肪酸合成酶在乳腺浸润性导管癌的表达变化及其意义

《肝型脂肪酸结合蛋白和脂肪酸合成酶在乳腺浸润性导管癌的表达变化及其意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、肝型脂肪酸结合蛋白和脂肪酸合成酶在乳腺浸润性导管癌的表达变化及其意义作者：李华,吕青薛晖,陈红【摘要】目的:探讨肝型脂肪酸结合蛋白（LFABP）和脂肪酸合成酶（FAS）与乳腺浸润性导管癌发生发展的关系。方法:用半定量逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和Westernblot等方法检测LFABP、FAS和血管内皮生长因子（VEGF）在86例乳腺浸润性导管癌中的表达变化。结果:LFABP和FAS主要分布于浸润性导管癌的腺泡和导管上皮细胞,LFABP的mRNA和蛋白质的表达量在Ⅲ级浸润性导管癌的较Ⅰ、Ⅱ级明显上调（P<0.05）。相反,FAS的表达量在Ⅲ级浸润性导管癌的较Ⅰ、Ⅱ级明显

2、下调,两者的表达无明显相关性（P>0.05）。但是,LFABP的表达与VEGF呈明显相关性。结论:在Ⅲ级浸润性导管癌,随着FAS表达下调,LFABP和VEGF的表达上调。【关键词】基因和蛋白质表达;肝型脂肪酸结合蛋白;脂肪酸合成酶;乳腺癌肝型脂肪酸结合蛋白(liverfattyacidbindingprotein,L10FABP)是首次从肝中克隆出来的小分子蛋白质,相对分子质量（Mr）约15000。有研究发现,LFABP在肝细胞癌和肝母细胞瘤中呈过度表达,在乳腺癌细胞株MCF7和T47D［1］和前列腺细胞株DU145［2］的表达较正常乳腺细胞株明显上调,在乳腺浸润性导管癌组

3、织的表达量较纤维腺瘤明显增加［3］,提示LFABP与肿瘤的密切关系。脂肪酸合成酶（fattyacidsynthase,FAS）在哺乳动物的内源性脂肪酸合成中起的关键作用。FAS合成产物有棕榈酸盐（80%）、豆蔻酸盐（10%）和硬脂酸盐（10%）,在人多数恶性肿瘤中呈过度表达,被认为是不良预后的分子标志。最近很多证据显示,FAS不但可整合与癌细胞代谢、增殖和存活有关的信号传导通路,还通过调节与恶性特征有关的Her2/neu(erbB2)、ER等癌蛋白,在肿瘤发展中扮演着重要的角色。作为结合及转运长链脂肪酸的LFABP与FAS,其在乳腺癌中的作用及其相互关系尚不清楚。大部分的脂肪酸结合

4、蛋白与长链脂肪酸以1∶1的比例结合,但是1摩尔的LFABP可结合2摩尔的长链脂肪酸以及乙酰基辅酶A、溶血磷脂、亚铁血红素和胆汁盐等疏水性配体。鉴于LFABP在恶性肿瘤中的表达及其与脂肪酸的亲和能力,我们检测了LFABP和FAS在乳腺浸润性导管癌的表达变化以及它们与临床病理指标的关系。此外,由于脂肪酸是通过血液运输的,我们还探讨了LFABP的表达与血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,10VEGF)的关系。1材料和方法1.1材料2005-05/2007-03在四川大学华西医院乳腺外科收集浸润性导管癌标本86例（表1）,年龄38～67岁（51

5、.28±8.21岁）,患者术前未经化疗或放疗。术中所取标本经患者知情同意。所取标本均立刻置于液氮中保存备用。组织/细胞总RNA提取试剂盒购自上海华舜生物工程有限公司。逆转录试剂盒（RevertAidTMfirststrandcDNAsynthesiskit）购自Fermentas公司。PCR反应预混液购自TaKaRa公司。小鼠抗人LFABP抗体购自R&D公司。兔抗人FAS、VEGF、βactin和辣根标记山羊抗小鼠IgG和山羊抗兔IgG（用于Westernblot）购自SantaCruz公司。APES、DAB和过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒SP9001、SP9002（

6、用于免疫组织化学染色）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。即用型SABC免疫组化染色试剂盒SA1025购自武汉博士德生物工程有限公司。PVDF膜购自Millipore公司。增强型化学发光试剂盒购自Pierce公司。表1患者的主要临床病理学资料1.2方法1.2.1RTPCR检测10总RNA提取及cDNA的逆转录严格按照相应的试剂盒中的说明操作。用TaKaRa公司设计、合成的引物进行目的片段的PCR扩增。引物序列见表2。对不同样本,用紫外分光光度计（Eppendorf）测定cDNA浓度,取等量cDNA进行PCR反应。25μL反应体系中含cDNA模板1μL,PCR预混液12.5μL,目的基因上

7、、下游引物（0.5μmol/L）各1μL,反应共28个循环。对RTPCR产物进行12g/L琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像系统观察照相,QuantityOne软件测定目的条带与βactine的光密度比值。表2LFABP、FAS、VEGF和ACTIN基因RTPCR反应的引物序列1.2.2免疫组织化学染色APES处理玻片,石蜡切片常规脱蜡至水,一抗LFABP的浓度为1∶50,其余为1∶100,以PBS缓冲液替代一抗作阴性对