略阳乌鸡酪氨酸酶基因(tyr)遗传变异分析

《略阳乌鸡酪氨酸酶基因(tyr)遗传变异分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、略阳乌鸡酪氨酸酶基因（TYR）遗传变异分析作者：路宏朝张涛江海李丽霞樊鹏辉來源：《湖北农业科学》2014年第05期摘更：试验通过PCR-SSCP技术检测略阳乌鸡酪氨酸解基因（TYR）部分启动了区、全部外显子和部分内含子的遗传多样性，并对不同基因型进行了测序和比对分析。结果表明，略阳鸡群体在TYR位点具有较为丰富的遗传变异，在所检测的启动子区有2个单核昔酸多态（SNP）位点；外显子1有2个SNP位点，外显子2、3、4没有检测到变异位点，外显子5存在5个SNP位点；检测的部分内含了2中发现2个SNP位点。mRNA上的7个变卅位点有3个发主在编码区，但都是同义突变，没有造成鼠基酸变卅。表明略阳乌鸡

2、和普通鸡的酪氨酸酚没有氨基酸序列差异，TYR基因在鸡的遗传上是高度保守的。启动子区和内含子区的遗传变异是否与酪氨酸酶的转录剪接和表达量有关，进而影响乌鸡黑色素的沉积还有待进一步研究。关键词：略阳乌鸡；酪氨酸酶基因（TYR）；遗传变异中图分类号:S831；S813.8文献标识码：A文章编号:0439-8114（2014）05-1123-05略阳乌鸡乂称黑河乌鸡，具有“六端乌”（乌皮、乌喙、乌腿、乌趾、乌舌、乌冠），体形大，生长快、产肉多、肉质细嫩鲜香，营养丰富，兼有药用价值，属优良肉用型地方鸡种，其羽色复朵，有黑羽、麻羽、门羽等，是经过长期选育形成的宝贵资源，主耍分布于秦岭以南略阳县的黑河坝、

3、观音寺、仙台坝、两河口等地，是陕西省惟一的家禽保护品种，农业部专家组來略阳调研时，将其与泰和乌鸡、那阳乌鸡、江山乌鸡共同列为屮国四大乌鸡品种，2008年被确立为“中国地理标志产品''［1・4］。乌鸡的滋补、药用价值主要是与其体内丰富的黑色素有关，黑色素具有延缓衰老、清除自由基、抗氧化、抗诱变、抗紫外线、抑制流感病毒等多种生理功能［5-l（）］o动物黑色索可分为两类，一是真黑色素（Eumelanin）,不含硫原子，呈棕色或黑色；二是脱黑色素（Pheomelanin）,含硫原子，呈黄色或微红棕色，乌骨鸡黑色素属于真黑色素，主要分布于乌鸡的羽毛、皮肤、骨骼和肌肉中［11,12］。黑色素沉着决定于其

4、所含真黑色素与脱黑色素的相对数量，而黑色素细胞屮酪氨酸酶活性和表达量与两种黑色素合成量比例呈正相关［11,13］。酪氨酸酶是控制黑色素生成的限速酶，酪氨酸在酪氨酸酶催化下生成3,4■二轻基丙苯氨酸（多巴），多巴进一步氧化生成多巴酿，多巴酿经多聚化反应与氧化反应生成多巴色索，在多巴色索异构酶作用下，多巴色索疑化为5,6■二疑基咄味竣酸（DHICA）,脱竣成5,6■二予仝基财味，再在酪氨酸酶催化下氧化成5,6■呵

5、味醍，最后与其他屮间产物结合形成真黑色索。脱黑色索合成前期(酪氨酸到多巴脱)与真黑色素一致，但在以后反应中有半胱氨酸(Cys)参加，产生Cys・多巴和Cys■多巴醍，然后通过关环、脱竣

6、、最终形成脱黑色索[13]。家禽中真黑色素的合成冃前多遵循经典的Mason-Raper途径，鸡的酪氨酸酶基因(TYR)定位在1号染色体的长臂4区4带[12,14]0本研究以略阳普通鸡、略阳麻羽乌鸡与略阳黑羽乌鸡3个群体为对彖，通过PCR和测序技术检测略阳鸡TYR基因的SNP,分析略阳鸡TYR基因的遗传变界对黑色索形成的影响，探讨略阳乌鸡黑色素形成过程屮TYR的分子作用机制，为开发利用这一宝贵资源提供理论基础。1材料与方法1.1材料从陕西汉中黑风乌鸡产业园采集21只略阳黑羽乌鸡(LYHY)的血液，汉中农贸市场采集略阳普通鸡(LYPT)和略阳麻羽乌鸡(LYMY)各1只的血液,加ACD抗凝,置于・

7、70°C低温冰箱中保存，根据《分子克隆实验指南》[15],釆用酚■氯仿抽提法提取基因组DNA,溶于TE中，4°C保存。1.2引用序列及引物序列从GcnBankW得鸡的TYR基因序列(GcnBank登录号：L46805和NC006088),TYR夕卜显子1及上游序列引物引自文献[16],采用Primer5.0自行设计TYR外显子2・5的引物，引物由上海桑尼生物科技有限公司合成(表1)。1.3PCR扩增反应体系及程序PCR反应总体系为25gL：lOxPCR缓冲液2.5pL,dNTP(10mmol/L)0.5pL,上下游引物(lOpmol/L)各1.2

8、1L,TaqDNA聚合酶(5U/pL)0.2

9、pL,DNA模板(50ng/yL)1.2pL,超纯水18.2pL。PCR反应程序：94°C预变性5min；94°C变性30s,55〜60°C(表1)退火30s,72°C延伸1min,进行34个循环；72°C延伸7min；12°C保存。1.4SSCP检测取2卩LPCR产物与8yL上样缓冲液（95%甲酰胺，0.25%二甲苯青，0.25%混酚蓝，20mmol/LEDTA）混匀，放入沸水煮沸10min,立即取出冰浴3