参桂胶囊微生物验证方法验证试验报告

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1、参桂胶囊微生物验证方法验证试验报告试样样品：品名：参桂胶囊批号：20050401、20050402、20050403一．计数方法的验证试验菌株：大肠埃希菌（Escherichiacoli）（CMCC（B）44102）金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）（CMCC（B）26003）枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）（CMCC（B）63501）白色念珠菌（Candidaalbicans）（CMCC（F）98001）黑曲霉（Aspergillusniger）（CMCC（F）98003）培养基：

2、营养肉汤培养基；营养琼脂培养基；改良马丁培养基；改良马丁琼脂斜面培养基等试验方法：本品经直接接种的方法验证试验，每株菌进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。1．菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30-35℃培养18-24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml含50-100个CFU的菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23-28℃培养24-48小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml含50-100个CFU的菌悬液。接种黑曲霉

3、的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5-7天。使大量的孢子产生。加入3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液，用玻璃棒将孢子洗脱。然后，用管口带有能过滤菌丝装置（如薄的无菌棉花或纱布的无菌毛细细管）吸出孢子菌液至无菌试管内，用比浊法，将菌液稀释至每毫升含50-100个CFU。2．供试液制备：称取供试品10g7，置灭菌的研钵中，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，研碎混匀，作为1：10的供试液。1．回收率测定（1）实验组：取试验菌液、供试液1ml分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平

4、皿法测定其菌数。（2）菌液组取上述试验菌液，测定其加入的试验菌菌数。（3）供试品对照组取供试液1ml，按平皿法测定其所含菌数。实验一：（样品20050401）（1）菌液组菌种平板大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉1646269566027368606352平均值68.56564.559.556菌落数（CFU/皿）6865646056（2）试验组菌种平板大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉1949285526229280946542平均值938689.558.552菌落数（CFU/皿）9386905

5、8527（3）供试品对照组项目稀释平板度细菌数（培养时间48小时）霉菌、酵母菌数（培养时间72小时）10-110-113602270平均值31.50菌落数（CFU/皿）32<10实验二：（样品20050402）（1）菌液组菌种平板大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉1656272606626079646457平均值62.570.568.6261.5菌落数（CFU/皿）6270686262（2）试验组菌种平板大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉195941046354290108906563平均值92

6、.5101976458.5菌落数（CFU/皿）92101976458（3）供试品对照组：项目稀释平板度细菌数（培养时间48小时）霉菌、酵母菌数（培养时间72小时）10-110-114602380平均值4207菌落数（CFU/皿）42<10实验三（样品20050403）（1）菌液组菌种平板大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉1626973586227660616753平均值6964.56762.557.5菌落数（CFU/皿）6964676258（2）试验组菌种平板大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉1

7、766275576126874706151平均值726872.55956菌落数（CFU/皿）7268725956（3）供试品对照组：项目稀释平板度细菌数（培养时间48小时）霉菌、酵母菌数（培养时间72小时）10-110-11140280平均值120菌落数（CFU/皿）12<10阴性对照：细菌（1）0　（2）0　　霉菌、酵母菌（1）0　（2）0结果判定：73次独立的平行试验中，试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分数）均不低于70%，表明该样品对验证实验菌无明显的抑菌作用。

8、结果见表1-5表1.大肠埃希菌（Escherichiacoli）（CMCC（B）44102）实验次数供试液稀释级菌落计数（CFU/皿）回收率（%）试验组菌液组供试品对照组11：1093683289.721：1092624280.631：1072691287.0表2.金黄色葡萄球菌（Staphylococ