熄风活络胶囊微生物限度检查方法验证

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1、熄风活络胶囊微生物限度检查方法验证1株洲市食品药品检验所湖南株洲412008:2湖南中医药高等专科学校附属第一医院（湖南省直中医医院）湖南株洲412000【】目的：建立熄风活络胶囊的微生物限度检查方法。方法：按照《中国药典》2010版一部附录微生物限度检查法验证的要求对熄风活络胶囊微生物限度检查进行了方法建立和验证研究。供试液制备采用稀释法，制成1:10供试液。釆用培养基稀释法（1:10供试液，每皿ImL）进行细菌计数检验，稀释法（1:10供试液，每皿ImL）进行霉菌及酵母菌计数检验，采用常规法进行控制菌

2、检查。结果：5种验证菌株的回收率均高于70%;控制菌检查经方法验证，可按常规法进行大肠埃希菌，大肠菌群及沙门菌检查。结论：建立的方法准确、可靠、重现性好，适用于熄风活络胶囊的微生物限度检查。【关键词】熄风活络胶囊；微生物限度；方法验证熄风活络胶囊是由当归、桃仁、白芷、酒大黄等20味中药组成的医院自制制剂，功能熄风豁痰，活血通络，主治中风病早、中期。按《中国药典2010年版一部》［1］要求，需做细菌数、霉菌及酵母菌数、控制菌检查，同时需对检验方法进行验证，以确保检验方法的准确可靠。1试验材料1.1仪器净化工

3、作台、全自动立式压力蒸汽消毒器、恒温水浴锅、TP-320A电子天平（感量O.Olg）、恒温培养箱（30〜35°C）、生化培养箱（25〜28°C）、锥形瓶（100〜150mL）、平皿（90mm）、量筒（100ml）、试管（18×180mm）及塞、吸管（1ml分度O.OlmL,10mL分度0.1mL）均于180°C干热灭菌2h或高压蒸汽121°C灭菌30min,烘干备用。1.2试验样品熄风活络胶囊湖南中医药高等专科学校附属第一医院批号:140922、140825、141213。1.3实验方法按《中

4、国药典2010年版一部》常规法，釆用ImL供试液加一个平皿，注入15〜20mL培养基作菌落计数。1.4实验菌株金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102、枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、白色念珠菌CMCC（F）98001,乙型副伤寒沙门菌CMCC（B）50094、黑曲霉CMCC（F）98003等，均购自中国医学细菌保藏中心。1.5培养基营养琼脂培养基（批号：140225）、玫瑰红钠琼脂培养基（批号：141203）、改良马丁培养基（批号：140527）、改良马丁琼脂培养

5、基（批号：140208）、营养肉汤培养基（批号：140614）、胆盐乳糖培养基（批号：1411151）（均由北京路桥技术有限公司生产）；MUG培养基（批号：201404233）（由广东环凯微生物科技有限公司生产）1.6试剂及稀释剂PH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液（批号：140216，由北京路桥技术冇限公司生产），0.9%火菌氯化钠溶液、錠基质试液。2细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证[2][3]验证试验进行三次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的冋收率。2.1方法2.1.1菌液制备接种金黄色葡

6、萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养肉汤中，在30〜35°C培养18〜24小吋；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，在25°C培养24〜48小时。上述培养物均用0.9%火菌氯化钠溶液制成每ImL含菌数为50〜1OOCFU的菌悬液，备用。2.1.2供试液制备分别取供试品各10g，加PH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液至lOOmL，制成1:10的均匀供试液，备用。2.1.3试验组细菌计数采用常规法。取1:10的供试液ImL，置平皿中，每个平皿加试验菌液ImL.加入营养琼脂培养基15〜2

7、0mL,平行制备2个平皿，放冷，倒置平板，在30〜35°C温度培养48小吋，观察结果。按《中国药典2010年版一部》微生物限度菌落计数方法测定菌数。霉菌和酵母菌计数采用常规法，取1:10的供试液ImL.置平皿中，每个平皿加试验菌液lmL,加入玫瑰红钠琼脂培养基15〜20mL,平行制备2个平皿，放冷，倒置平板，在25°C温度培养72小吋，观察结果。按《中国药典2010年版一部》微生物限度菌落计数方法测定菌数。2.1.4菌液组分别取50〜100CFU/mL的试验菌液ImL注入平皿中，立即倾注培养基，平行制备2

8、个平皿，置适宜温度培养48〜72小时，观察结果，按《中国约典2010年版一部》微生物限度菌落计数方法测定菌数。2.1.5供试品对照组按《中国药典2010年版一部》微生物限度菌落计数方法测定本品的本底数。采用常规法检查细菌数、霉菌及酵母菌数。2.1.6稀释剂对照组取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液ImL代替供试液，余下同试验组。2.2菌冋收率试验验证试验进行三次独立的平行试验，并分别计算各次试验的菌冋收率。2.3结果判断试验组