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1、诺氟沙星胶囊微生物限度检查方法验证摘要:目的建立诺氟沙星胶囊微生物限度检查的方法,确保检验的准确性。方法联合采用薄膜过滤和在培养基加入MnS04的方法,验证诺氟沙星胶囊微生物限度检查方法。结果采用联合方法,可去除诺氟沙星胶囊的杀菌活性,检岀样品的污染菌。结论此方法可用作诺氟沙星胶囊微生物限度的检查。关键词:诺氟沙星胶囊;薄膜过滤法:硫酸猛中图分类号:R978.1文献标识码:A文章编号:1672-979X(2010)11-0437-02诺氟沙星是氟哇诺酮类抗菌药,具有广谱抗菌作用,对革兰阴性菌的抑菌活性高。所以
2、,在诺氟沙星胶囊的微生物限度检查中,为了彻底去除其杀菌活性,保证药品检验的准确可靠,提高工作效率,我们采用薄膜过滤联合培养基加入硫酸猛(MnS04)的方法,验证了诺氟沙星胶囊微生物限度的检查方法。1仪器与材料1.1仪器XMTB型水浴(北京长风);LD4-2A型台式离心机(北京医用离心机厂);HTY-2000A型智能集菌仪(杭州泰林);FC50型一次性薄膜过滤器(杭州泰林)GMP-9160E隔水式恒温培养箱(上海新诺)。1.2供试品诺氟沙星胶囊系石药集团欧意药业公司、哈药集团制药总厂、雅来(佛山)制药公司和河南
3、天方药业公司生产。1.3培养基和试剂营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,胆盐乳糖增菌液(北京三药)。0.1mol/LMnSo4+,pH7.0氯化钠一蛋白月东缓冲液,0.1%蛋白月东水溶液(中国药品生物制品检定所)。枯草芽翘杆菌[cMCC(B)63501],金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003],大肠埃希菌[CMCC(B)44102],白色念珠菌[CMCC(B)98001],黑曲霉[CMCC(B)98003](中国药品生物制品检定所)。2方法液制备按中国药典2005年版二部附录XIII微生物限度检查法制备菌
4、液,浓度50-100cfu/mL,各种菌的计数结果见表1O2.2供试液制备取供试品10g,加pH7.0无化钠,蛋白月东缓冲液至100mL,置于459水浴溶解,作为伯0供试液;取伯0供试液,500r/min离心5min,取上清备用。2.3常规法的方法验证取伯0供试液1mL和大肠埃希菌液1mL注入平皿(1mL/nn),立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基,平行制备2个平皿:枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、白色念珠菌亦依上法操作。置入369培养箱培养18-24ho结果见表2。2.4薄膜过滤法的方法验证取供试品上清1mL
5、力口0.1%无菌蛋白月东水溶液至100mL,全量通过一次性薄膜过滤器,用pH7.0氯化钠一蛋白月东缓冲液冲洗滤膜2次(100mL/次),最后一次冲洗液加入大肠埃希菌液1mLo将滤膜贴至含5mLMnSo4和20mL营养琼脂培养基的平板,369培养箱培养18-24h,观察结果;枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌亦依上法操作,结果见表3O2.5控制茵的方法验证取供试品上清10mL加0.1%无菌蛋白籐水溶液至100mL,全量通过一次性薄膜过滤器,用pH7.0氯化钠,蛋白月东缓冲液冲洗滤膜2次(100mL/次),将滤膜和大肠
6、埃希菌液1mL加入5mLMnS04和100mL胆盐乳糖增菌液(1:20),369培养箱培养18-24h,结果见表4。3结果结果见表1~4。4讨论4.1由表2可见,诺氟沙星胶囊用常规法检验时,对白色念珠菌、黑曲霉的阳性菌加入回收率均达到100%,无抑甘作用;对其他3种细菌有很强的抑菌作用。m2Ei£3Ei£34.2由表3、表4可见,诺氟沙星胶囊采用薄膜过滤法(MnSO4加到培养基中),在水温459,冲洗量300mL时,对大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌的回收率均>95%;控制菌检查阳性,无抑菌作用。4.
7、3采用薄膜过滤法时,控制水温在45乜,可增加供试品的溶解度。4.4建议生产培养基时,针对不同的抗生素,将中和剂混合至干燥培养基中,效果会更理想。参考文献⑴国家药典委员会,中国药典2005年版二部[M],北京:化学工业岀版社,2005,附录93.