诺氟沙星胶囊微生物限度检查方法验证

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1、诺氟沙星胶囊微生物限度检查方法验证摘要：目的建立诺氟沙星胶囊微生物限度检查的方法,确保检验的准确性。方法联合采用薄膜过滤和在培养基加入MnS04的方法，验证诺氟沙星胶囊微生物限度检查方法。结果采用联合方法，可去除诺氟沙星胶囊的杀菌活性，检岀样品的污染菌。结论此方法可用作诺氟沙星胶囊微生物限度的检查。关键词：诺氟沙星胶囊；薄膜过滤法：硫酸猛中图分类号：R978.1文献标识码：A文章编号：1672-979X(2010)11-0437-02诺氟沙星是氟哇诺酮类抗菌药，具有广谱抗菌作用，对革兰阴性菌的抑菌活性高。所以

2、，在诺氟沙星胶囊的微生物限度检查中，为了彻底去除其杀菌活性，保证药品检验的准确可靠，提高工作效率，我们采用薄膜过滤联合培养基加入硫酸猛（MnS04）的方法，验证了诺氟沙星胶囊微生物限度的检查方法。1仪器与材料1.1仪器XMTB型水浴（北京长风）;LD4-2A型台式离心机（北京医用离心机厂）；HTY-2000A型智能集菌仪（杭州泰林）;FC50型一次性薄膜过滤器（杭州泰林）GMP-9160E隔水式恒温培养箱（上海新诺）。1.2供试品诺氟沙星胶囊系石药集团欧意药业公司、哈药集团制药总厂、雅来（佛山）制药公司和河南

3、天方药业公司生产。1.3培养基和试剂营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，胆盐乳糖增菌液（北京三药）。0.1mol/LMnSo4+,pH7.0氯化钠一蛋白月东缓冲液,0.1%蛋白月东水溶液（中国药品生物制品检定所）。枯草芽翘杆菌[cMCC（B）63501],金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，大肠埃希菌[CMCC(B)44102],白色念珠菌[CMCC(B)98001],黑曲霉[CMCC(B)98003](中国药品生物制品检定所）。2方法液制备按中国药典2005年版二部附录XIII微生物限度检查法制备菌

4、液，浓度50-100cfu/mL,各种菌的计数结果见表1O2.2供试液制备取供试品10g,加pH7.0无化钠，蛋白月东缓冲液至100mL,置于459水浴溶解，作为伯0供试液；取伯0供试液，500r/min离心5min,取上清备用。2.3常规法的方法验证取伯0供试液1mL和大肠埃希菌液1mL注入平皿(1mL/nn),立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，平行制备2个平皿：枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、白色念珠菌亦依上法操作。置入369培养箱培养18-24ho结果见表2。2.4薄膜过滤法的方法验证取供试品上清1mL

5、力口0.1%无菌蛋白月东水溶液至100mL,全量通过一次性薄膜过滤器，用pH7.0氯化钠一蛋白月东缓冲液冲洗滤膜2次(100mL/次),最后一次冲洗液加入大肠埃希菌液1mLo将滤膜贴至含5mLMnSo4和20mL营养琼脂培养基的平板，369培养箱培养18-24h,观察结果；枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌亦依上法操作，结果见表3O2.5控制茵的方法验证取供试品上清10mL加0.1%无菌蛋白籐水溶液至100mL,全量通过一次性薄膜过滤器，用pH7.0氯化钠，蛋白月东缓冲液冲洗滤膜2次(100mL/次),将滤膜和大肠

6、埃希菌液1mL加入5mLMnS04和100mL胆盐乳糖增菌液(1:20),369培养箱培养18-24h,结果见表4。3结果结果见表1~4。4讨论4.1由表2可见，诺氟沙星胶囊用常规法检验时，对白色念珠菌、黑曲霉的阳性菌加入回收率均达到100%,无抑甘作用；对其他3种细菌有很强的抑菌作用。m2Ei£3Ei£34.2由表3、表4可见，诺氟沙星胶囊采用薄膜过滤法（MnSO4加到培养基中）,在水温459,冲洗量300mL时，对大肠埃希菌、枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌的回收率均＞95%;控制菌检查阳性，无抑菌作用。4.

7、3采用薄膜过滤法时，控制水温在45乜，可增加供试品的溶解度。4.4建议生产培养基时，针对不同的抗生素，将中和剂混合至干燥培养基中，效果会更理想。参考文献⑴国家药典委员会，中国药典2005年版二部［M］，北京：化学工业岀版社，2005,附录93.