肺炎克雷伯菌荧光定量pcr检测方法的建立和临床应用

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1、分类号：单位代码：密级申请号：硕士学位论文同等学力）中文论文题目：肺炎克雷伯菌荧光定量检测方法的建立和临床应用英文论文题目：申请人姓名直指导教师陈津忠副教榜专业名称研究方向丨隨脅棘所在学院淅江大学医学院申请人单位杭州市江千区人民医院论文提交日期年月肺炎克雷伯菌荧光定量检测方法的建立和临床应用论文作者签名：指导教师签名：论文评阅人士评阅人评阅人答辩委员会主席：委员委员委员、委员委员答辩日期：■浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，

2、也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名导师签名：签字日期：年月么日签字日期：年》月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期年月日签字日期：年）月曰浙江大学硕卜学位论文致

3、谢致谢在即将完成硕士毕业论文之际，我由衷的感谢所有给予我关心、支持和帮助的各位亲朋好友和良师益友！首先诚挚地感谢我的导师陈建忠教授，从课题的选题到完成，陈教授都给予了无私的关怀和帮助。在导师的悉心指导和辛勤培养下，使我能顺利完成硕士阶段的学习任务。在攻读硕士学位期间，导师渊博的知识、严谨的学术作风、敏锐的科学洞察力以及为人师表的风范给了我巨大的启迪和鞭策，并将成为我人生路上的楷模。在此，对导师在我学业上的精心指导表示最崇高的敬意和最衷心地感谢其次感谢浙江大学附属第一医院，传染病实验室的朱海红老师、吴珊珊、史逸娴及检验科陈黎明在我的学习和研究过程中给予的帮助和支持。最后还要感谢

4、支持和关心我的家人，使我能安心完成学业！浙江大学硕士学位论文中文摘要肺炎克雷伯菌荧光定量检测方法的建立和临床应用浙江大学医学院免疫学硕士研究生冉艳导师陈建忠副教授中文摘要研究背景肺炎克雷伯菌（，属于肠杆菌科克雷伯菌属，最早由于年从大叶性肺炎患者的肺组织中首次分离到。克雷伯菌为革兰阴性杆菌，无鞭毛，无芽孢，在营养丰富的培养基上可形成荚膜。多数菌株有菌毛，具有菌体抗原、荚膜抗原、菌毛抗原等多种主要抗原成分。该菌为兼性厌氧菌，营养要求不高，在培养基上可形成较大、凸起、灰白色粘液型的菌落。典型的肺炎克雷伯菌是一种条件致病菌，它能使免疫力低的人群易获得医院感染。该菌在正常人口咽部的带菌

5、率为，但在住院病人中可高达，是糖尿病病人和慢性阻塞性肺病患者并发肺部感染的潜在危险因素〔〕。近年来，由于这些典型的肺炎克雷伯菌株出现了耐药情况，且呈上升趋势，使得该菌在临床治疗上极为棘手。最近有报道称，一种新的高毒性的肺炎克雷伯菌变种已经出现，它的临床特征为能在年轻的健康人群中引发严重的、威胁生命的社区获得性感染。这些感染包括肝脓肿、肺炎、脑膜炎、感染性眼内炎和转移性葡萄膜炎。如果这些菌株也出现了耐药趋势，那么临床治疗将会面临巨大的挑战〔，〕。因此，临床迫切需要一种快速，准确和简便的方法来鉴定出病原菌，以辅助临床选择有效的抗生素来减少致死率和耐药菌株的出现⑶〕。细菌培养鉴定是

6、目前常用的检测肺炎克雷伯菌的方法，一般需要经过分离培浙江大学硕丄学位论文中文摘要养，生化反应鉴定，血清学鉴定，肠毒素测定等步骤。尽管临床上已有半自动和全自动微生物鉴定和药敏系统（例如系统），但整个培养鉴定过程至少需要小时，耗时耗力，不能满足目前临床快速诊断的要求。实时荧光定量技术是目前常用的分子诊断技术，与常规细菌培养法比较，它具有特异性强、重复性好、定量准确、大批量检测、自动化程度高等优点本研究旨在建立检测肺炎克雷伯菌的荧光定量方法，对其敏感性、特异性等进行评价，并应用此方法对临床疑似肺炎克雷伯菌感染的患者的痰液标本进行检测，为其临床应用奠定基础。方法：建立实时荧光定量检测

7、肺炎克雷伯菌的方法通过检测不同浓度梯度的肺炎克雷伯菌标准株（种非肺炎克雷伯菌及重复检测低、中、高三个浓度的肺炎克雷伯菌标准株来评价其线性、敏感性、特异性及精密度。收集年月至月期间浙江大学附属第一医院疑似肺炎克雷伯菌感染住院病人例痰液标本。用建立的实时荧光定量法检测标本，与细菌培养法比较，分析敏感性和特异性。结果：巳建立的实时荧光定量法在肺炎克雷伯菌浓度范围内有良好的线性，线性相关系数为。实时荧光定量法的最低检测限为。本方法检测其它常见致病菌（金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、甲型溶血性链球菌、绿脓杆菌、大肠埃